吸光光度法 - 食品伙伴网.ppt

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1、比色及吸光光度法7/16/20211Analyticalchemistry教学指导：吸光光度法简介吸光光度法基本原理可见分光光度法及其仪器吸光光度法应用7/16/20212Analyticalchemistry吸光光度法（AbsorptionPhotometry）：基于物质对光的选择性而建立的分析方法。包括比色法、紫外可见分光光度法、红外分光光度法。广泛用于无机物和有机物的定性和定量分析。目视比色法→光电比色第一节吸光光度法简介7/16/20213Analyticalchemistry分光光度法特点：灵敏度高：试样中1%-0.001%微量成分准确

2、度较高：相对误差2%-5%（1%-2%）。；几乎所有的无机离子有许多有机化合物；操作简便、快速、仪器价格适中、用途广。7/16/20214Analyticalchemistry第一节吸光光度法简介一、光的基本性质1、光的波粒二象性波动性：光以波的形式传播，可用波长、频率来表示。波长：两个相邻波峰或波谷间的距离（nm）频率：单位时间里通过一固定点处波的数目（s-1）=c/光速c=3×1010cm/s7/16/20215Analyticalchemistry第一节吸光光度法简介粒子性：光由光子组成，具有能量。△E=h=hc/h为普朗克常数

3、6.63×10-34J.s7/16/20216Analyticalchemistry2、光谱分区能量小200nm400nm780nm大波长光谱区域紫外光区可见光区红外分析方法紫外分光光度法可见分光光度法50um红外分光光度法紫、蓝、青、绿、黄、橙、红7/16/20217Analyticalchemistry二、物质对光的吸收1、物质对光选择性吸收的实质一束光通过某物质时该物质的分子、原子或离子与光子发生碰撞，光子的能量转移至分子、原子或离子上，使这些粒子发生能级变化，由基态跃迁至较高能态，这个过程即为吸收。光是否被物质吸收，取决于光子的能量物质的

4、结构只有当能级差△E与光子能量h相当时物质吸收光。7/16/20218Analyticalchemistry2、物质的颜色与光吸收的关系复合光与单色光单色光：具有单一波长的光。复合光：由不同波长的单色光按一定比例组成的光如白光。7/16/20219Analyticalchemistry溶液颜色与光吸收的关系溶液对光的吸收：若溶液透明、均匀，人眼看到的溶液颜色是由透射光的波长决定的。当入色光为白光（复合光），溶液吸收的光与透射的光互补。互补色：组成白光的两种光。光的互补：蓝黄7/16/202110Analyticalchemistry互补色示

5、意图蓝450-480紫400-450红650-750青蓝480-490青490-500绿500-580黄580-600橙600-650白光7/16/202111Analyticalchemistry溶液对光的作用示意图7/16/202112Analyticalchemistry溶液颜色与吸收光颜色和波段的关系溶液的颜色吸收光颜色波段（nm）黄绿黄橙红紫红紫蓝青蓝青紫蓝青蓝青绿黄绿黄橙红400~450450~480480~490490~500500~560560~580580~600600~650650~7607/16/202113Analytic

6、alchemistry721型分光光度计7/16/202114Analyticalchemistry3、吸收曲线（吸收光谱）吸收曲线：吸光度随波长变化的曲线。吸收曲线的特点：不同的物质因其分析结构不同而具有不同的吸收曲线；同一物质，浓度不同，其吸收曲线的形状和λmax的位置不变，但在同一波长下吸光度随浓度的增大而增大。吸收曲线是吸光度法选择测量波长的依据。7/16/202115Analyticalchemistry吸光度A吸收曲线图4005006000.1000.2000.3000.4007/16/202116Analyticalchemistr

7、y7/16/202117Analyticalchemistry1.朗伯—比耳定律布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。A∝b1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系。A∝c二者的结合称为朗伯—比耳定律。第二节吸光光度法基本原理7/16/202118Analyticalchemistry朗伯—比耳定律吸光度A：表征物质对光吸收程度的量。A=lgIi/I0=-lgT=bcA--吸光度--摩尔吸光系数C--被测物浓度Ii--入射光强T--

8、透过率b--液层厚度（光程长度）I0--透射光强7/16/202119Analyticalchemistry例：用1,10-二氮菲光度法