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1、第32讲 微生物的应用与传统发酵技术一、微生物的实验室培养二、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数三、分解纤维素的微生物的分离四、果酒和果醋的制作五、腐乳制作六、制作泡菜并检测亚硝酸盐含量必备知识突破1微生物的培养和应用突破2传统发酵技术深化突破一、微生物的实验室培养1.培养基(1)概念:人们按照微生物对①营养物质的不同需求,配制出供其②生长繁殖的营养基质。(2)营养构成:一般都含有水、③碳源、氮源和无机盐。此外还要必备知识满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及④氧气的要求。(3)种类:按照物理性质可分为⑤液体培养基、⑥固体培养基和
2、半固体培养基。2.无菌技术(连一连)⑦A、B、F—b—Ⅰ、Ⅱ C、D、E—a—Ⅲ、Ⅳ3.大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基配制步骤:计算→⑧称量→溶化→⑨灭菌→倒平板。(2)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌,其关键的步骤是⑩接种。纯化培养方法:平板划线法和稀释涂布平板法。纯化培养原理:在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落,即可获得较纯的菌种。二、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数1.分离原理土壤中细菌之所以能分解尿素,是由于它们能合成脲酶,这种物质在尿素分解成无机物的过程中起催化作用。以尿素为唯一氮源的培养基能
3、促进分解尿素的细菌的生长和繁殖,并抑制或阻止其他微生物的生长,从而将目的菌分离出来。2.统计菌落数目统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法。3.实验流程土壤取样→制备培养基→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。三、分解纤维素的微生物的分离1.纤维素酶(1)组成:纤维素酶是一种复合酶,它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。(2)作用2.菌种筛选(1)方法:刚果红染色法。(2)原理纤维素分解菌↓→红色复合物红色消失、出现透明圈即使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基,根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。3.筛选流程土壤取样:富含
4、纤维素的环境↓选择培养:用选择培养基培养,以增加纤维素分解菌的数量↓梯度稀释↓涂布平板:将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上↓挑选产生透明圈的菌落:产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈四、果酒和果醋的制作1.制作原理与条件果酒制作果醋制作菌种酵母菌醋酸菌制作原理反应有氧条件下(反应式如下),大量繁殖:C6H12O6+6O26CO2+6H2O。无氧条件下,酒精发酵:C6H12O62C2H5OH+2CO2氧气充足、糖源缺少时:C2H5OH+O2CH3COOH+H2O。糖源、氧气充足时:C6H12O6+2O22CH3COOH+2CO2+
5、2H2O发酵条件温度一般酒精发酵温度控制在18~25℃,繁殖最适温度为20℃左右最适温度为30~35℃空气前期:需氧;后期:不需氧需充足的氧气时间10~12d7~8d2.果酒、果醋的制作流程挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵↓ ↓果酒果醋五、腐乳制作1.原理(1)菌种:需多种微生物协同作用,其中起主要作用的是毛霉。(2)菌种的作用特点蛋白质氨基酸+小分子肽脂肪甘油+脂肪酸2.实验流程让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。六、制作泡菜并检测亚硝酸盐含量1.泡菜的制作原理(1)菌种:泡菜的制作离不开乳酸菌,
6、在无氧条件下,乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。(2)腌制条件:控制腌制的时间、温度和食盐的用量,防止杂菌污染,严格密封。2.泡菜的制作流程3.测定亚硝酸盐含量的原理和操作流程(1)亚硝酸盐与人体健康的关系a.当人摄入总量较多时,可引起中毒或死亡。b.在一定条件下亚硝酸盐可转化为致癌物——亚硝胺。(2)亚硝酸盐含量的测定原理:N+对氨基苯磺酸反应物;反应物+N-1-萘基乙二胺盐酸盐→玫瑰红色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进行目测比较,可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。操作流程:配制溶液→制备标准显色液→制备样品处理液→
7、比色。1.培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分。(√)2.在配制培养基时,除满足营养需求外,还应考虑pH、氧气及对特殊营养物质的需求。(√)3.培养基分装到培养皿后进行灭菌。(✕)4.消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害。(√)7.倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上。(✕)8.用稀释涂布平板法培养计数,应选择有30~300菌落数的平板。(√)5.研究和应用微生物的前提是防止杂菌入侵,获得纯净的培养物。(√)6.对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等要进行灭菌,而对实验操
8、作空间、操作者的衣着等要进行消毒。(√)11.变酸的酒的表面的菌膜是酵母菌大量繁殖形成的。(✕)12.在果酒发酵后期,拧开瓶盖的间隔时间可延长。(√)13.探究酵母菌的呼吸方式,可用溴麝香草酚蓝检测产生的酒精。(✕)14.醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸。(✕
