DB41T1103-2015太行菊组织培养技术规程.pdf

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1、ICS65.020B62DB41河南省地方标准DB41/T1103—2015太行菊组织培养技术规程2015-08-13发布2015-11-13实施河南省地方标准公共服务平台河南省质量技术监督局发布DB41/T1103—2015前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省林业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：郑州大学、河南省绿洲园林有限公司。本标准主要起草人：史屹峰、黄进勇、张建波、刘彬、赵志营、王景玉、李娇。本标准参加起草人：崔青艳、韩玉霞、乔林、张献计、王俊、复鹏、田小娟、李幸红

2、、岳彩鹏、朱世新。河南省地方标准公共服务平台IDB41/T1103—2015太行菊组织培养技术规程1范围本标准规定了太行菊组织培养的术语和定义、培养基的配制、组织培养、炼苗移栽。本标准适用于太行菊组织培养。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1太行菊太行菊(Opisthopapustaihangensis)，菊科菊蒿亚族太行菊属多年生宿根草本植物，中国太行山区特有珍稀物种。3培养基的配制3.1培养基选择选择MS培养基为基本培养基（MS培养基参见附录A）。3.2母液与激素的配制3.2.1大量元素母液的配制大量

3、元素母液按50倍配制。使用时再稀释50倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。3.2.2微量元素母液的配制微量元素母液按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。3.2.3有机母液的配制有机母液按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。3.2.4铁盐母液的配制分别溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，加热并不断搅拌，使完全溶解，冷却后，将2种溶液混合，再用蒸溜水加至所需容积，按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放

4、置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。3.2.56-苄氨基腺嘌呤配制称取河南省地方标准公共服务平台100mg6-苄氨基腺嘌呤（6-BA），用少量0.1mol/LHCL加热溶解，再用蒸馏水定容至100mL,1DB41/T1103—2015浓度为1.0mg/L。3.2.6萘乙酸配制称取10mg萘乙酸（NAA），用1mL无水乙醇溶解，再用蒸馏水定容至100mL，浓度为0.1mg/L。3.3培养基配方3.3.11/2MS基本培养基：1/2MS+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；3.3.2丛生芽诱导培养基：MS+0.1mg/LN

5、AA+1.0mg/L6-BA+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；3.3.3生根培养基：1/2MS+0.2mg/LNAA+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；3.3.4无激素基本培养基：MS+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条。3.4配制以配制10L培养基为例，按顺序进行如下操作：a)MS为基本培养基，取少量蒸馏水倒入容器内，除了大量元素母液取200mL外，其余母液均取100mL倒入容器内；1/2MS为基本培养基时；取少量蒸馏水倒入容器内，除了大量元素母液取100mL外，其余母液均取50mL倒入容器内；b)称取30

6、0g蔗糖倒入容器，搅拌溶解；c)加蒸馏水定容至10L；d)按照培养基配方，加入NAA和6-BA。丛生芽诱导培养基加10mLNAA和100mL6-BA；生根培养基加20mLNAA；e)称取100g琼脂条，倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂条熔化；f)稍微冷却后，用精密试纸或酸度计调整pH至5.7～5.8，分装；2g)对分装好的培养基用高温高压蒸汽消毒，压力1.1kg/cm、温度121℃条件下保持25min，待灭菌完成好，压力为0的时候取出培养基，平放在地面上冷却凝固。4组织培养4.1培养材料及消毒4

7、.1.1培养材料的选择和确定10月底至11月初，采集当年饱满太行菊的种子作为培养材料，存放于4℃冰箱。4.1.2消毒灭菌将种子用自来水冲洗2h后，在超净工作台内用75%酒精漂洗15s，后用2%的次氯酸钠浸泡8min（加2滴聚山梨酯），蒸馏水冲洗2～3次。4.2无菌播种用无菌滤纸把种子表面附着的水分吸干净，然后在在超净工作台内用镊子将种子接种到1/2MS培养基上，置入温度为20℃～25℃光照培养室内诱导种子萌发，待种子发芽长出2片真叶，进行光照处理，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养30d～35d。4.3

8、诱导及分化河南省地方标准公共服务平台2DB41/T1103—2015切除长出来的无菌幼苗根部部分，把得到的无菌苗茎接种到丛生芽诱导培养基上，放到光照培养室培养30d。4.4增殖继代培养将诱导出来的丛生芽分割成含2～3个小芽的芽丛，切去死叶和基部黄褐色疏松组织，继续接种到丛生芽诱导培养基上，放置于光照培养室进行增殖继代培养，30d为一个周期，如此循环。4.5培