鸡胚接种方法.ppt

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1、鸡胚接种技术方法应用价值存在问题动物接种应用最早；方法简便；结果易于观察自身带病毒；有的接种后不敏感；动物饲养问题鸡胚培养来源客观，易于管理，带病毒机会少；多途径接种敏感病毒谱窄细胞培养应用广泛，敏感病毒谱广设备技术要求条件高病毒分离培养鸡胚培养法的优点：1.它的组织分化程度低，可选择适当途径接种，病毒易复制，感染病毒的膜和液体含大量病毒。2.是个整体，有神经血管的分布及脏器的构造。3.来源充足，操作简单，通常是无菌的，对接种的病毒不产生抗体。鸡胚培养法的缺点：1.一般的病毒通常不使鸡胚产生特异性的感染指征。2.卵黄中常常含有抗家禽病原体的母体抗体

2、。3.某些细菌、衣原体和病毒能够从感染的母鸡传递到鸡胚。4.通常鸡胚常常含有白血病病毒。5.在鸡食物中加入抗菌素，母鸡吃后会传递给鸡胚，鸡胚就会产生对立克次体和衣原体感染的抵抗。二、鸡胚的结构与生理鸡胚是由三个胚层发育起来的，即外胚层，中胚层和内胚层，它们构成胚胎的组织与器官。（约10日龄鸡胚的结构见图）气　室鸡　胚卵黄囊尿囊腔羊膜腔绒毛尿囊膜卵　白卵膜鸡胚的管理（一）鸡胚的选择首选健康莱亨鸡受精卵，其壳洁白易于观察胚胎，其他受精卵也可使用。接种病毒的受精鸡卵应未感染已知病毒或其它微生物（如新城疫病毒或支原体等），最好来自无特定病原体（specif

3、ied-pathogensfree，SPF）鸡群，接种立克次体的受精鸡卵应来自未食用高浓度抗生素的鸡群。鸡胚的孵育受精鸡卵孵育时不要擦洗，以免受细菌污染。最好用能自动调节温度、湿度、气流及翻卵的孵卵箱孵育。如没有，也可用普通恒温箱，但要在温箱中放一盛满水的方盘，以保持适当的湿度。孵育应在37℃－39℃、40%―70%的相对湿度下进行。湿度太高会使气室发育过度，而湿度过低又会导致气室发育不良，甚至造成鸡胚死亡。通气也很重要，如果空气不流通，也可造成鸡胚死亡。为了避免胚胎膜粘连和胚胎发育不均匀，应每隔一段时间转动一次受精鸡卵。检卵在发育的早期，鸡胚不易

4、辨认，要到4－5天后才容易看见。因此，检卵要在孵育4－5天后进行。活的鸡胚绒毛尿囊膜界线较明显，上面的血管清晰可见、成网状，可看到明显的胚胎自主运动。如果胚胎活动呆滞或不能自主运动，血管模糊、变细、折断脱落，绒毛尿囊膜界线模糊，说明鸡胚已濒临死亡或已经死亡。接种前后都要检卵。接种前检卵是要了解鸡胚的存活情况，标记气室边界和胚胎位置；接种后检卵是为了观察接种后胚胎的状况。发育正常胚与异常胚的辩别1、正常胚头照可见眼点明显，血管色鲜红，呈放射状；二照可见整个蛋除气室外均布满鲜红血管（合拢）三照时蛋的小头看不到发亮部分（封门），气室界线边缘血管鲜红。2、

5、弱胚蛋头照胚体小，呈低阶段纤细血管，眼点不明显；二照可见小头有0.5cm2以上区域无血管分布；三照时小头发亮，气室界线边缘的血管面较大。3、死胚蛋头照可见血点、血线或血环紧贴内壳面，血管色因氧化而比活胚深，有时散黄或有灰白色凝块；中期死胚特征是气室界线模糊，胚胎呈黑团状，常与壳粘连，不动，当手摇胚蛋时，胚胎随之转动，停止摇晃时也随之停止。而活胚时刻在活动；三照死胚的小头发亮，血管色深，气室界线模糊，蛋体发凉；对尚未出壳的也可用温水来判断将蛋放入40°C温水中，凡是在水中轻微晃动的为活胚，反之则为死胚。三、材料（一）受精鸡卵（二）孵卵箱或恒温箱（三）

6、捡卵灯，照卵灯（四）砂轮、三棱针（五）卵盘、卵杯（六）其它：1ml注射器，针头，2.5%碘酒，75%酒精，镊子，无菌生理盐水，毛细吸管，橡胶吸头，液体石蜡，蜡和胶布等。四、接种技术（一）活胚检查1.血管：活胚可见清晰的血管，有时可见血管搏动，死胚血管模糊成淤血带或淤血块。2.胎动：活胚可见明显的自然运动，尤其在转动胚胎时，死胚见不到任何胎动，胚胎发红像出血样，有的呈现黑块。3.血管网是否丰满：发育好的鸡胚可见密布丰满的血管网，也就是绒毛尿囊膜，死胚则见不到这一现象。第一天胚盘直径0.7cm，胚重0.2mg，在胚盘明区形成原条，其前方为原结，原结前端

7、为头突，头突发育形成脊索神经管，中胚层的细胞沿着经管两侧，形成左右对称的呈方形薄片的体节4-5对，中胚层进入暗区在胚部的边缘出现许多红点，俗称血岛；第二天胚盘直径1.0cm，胚重3mg，卵黄囊羊膜绒毛膜开始形成，胚胎头部开始从胚盘分离出来，血岛合并形成血管，入孵25小时心脏开始形成，30-42小时后心脏开始跳运，可见到20-27对体节，照蛋时可见卵黄囊血管区，形似樱桃，俗称樱桃珠第三天胚长0.55cm，胚重20mg，尿囊开始长出，胚的位置与蛋的长轴垂直，开始形成前后肢芽，出现5个脑胞的原基，眼的色素开始沉着，有35对体节，照蛋时，可见胚和伸展的卵黄

8、囊血管形似蚊子，俗称“蚊虫珠”；第4天胚长0.77cm，胚重50mg，孵黄囊血管包围蛋黄达1/3，肉眼明显看到尿囊，羊膜腔