API使用培训.ppt

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1、API系统-构成:试条由特別选择的生化反应小管API试条有多种类各有相应的数据库所有生化结果以同时间一并阅读API系统试条由10,20,50.....测试组成不等结果：鉴定百分率基本单位：条目（Taxa)-种(PseudomonasAeruginosa)-生物型号(E.Coli1)-属(SalmonellaSpp.)-一群菌种(Aeromonashydrophilia/cavicie)所引用的分类学跟国际认可的一样-InternationalJournalofSystematicBac

2、teriology资料库＝整个系统的心脏API资料库，不断更新，跟据-分类学的进化-新的菌种-生化反应的演进-鉴定菌种需要的改变优点：-标准化，简易化-在制造过程中，进行质控-FDA标准-用家可用ATCC菌种进行质控-系统化-操作简易-快速报告-20年经验，拥有菌种资料＞25000，鉴定系统的发源生化测试＞750-＞1500文献與不同国家地區的权威机构交流美国日本澳大利亞欧洲API鉴定范围庞大资料库15种试条>550种细菌可被鉴定研究用试条：乳酸杆菌，芽胞菌，变曲菌简单方便以同一基础概念运用标准

3、化方法快速结果4-24小时降低成本成品化，单一化试剂简单判读结果选条的标准革兰氏阴性杆菌分类革兰氏阴性杆菌氧化酶+非肠道菌鉴定API20NE肠道杆菌鉴定API20E氧化酶-革兰氏阳性杆菌分类革兰氏阳性杆菌触酶-触酶+短小脱色含有异染颗粒slightdiscoloration(granulations)短球杆菌延长状杆菌细小不透光菌落20-25°C有动力37°C无动力李斯特菌鉴定APIListeria乳酸菌鉴定API50CHL棒状杆菌鉴定APICoryne大体积产芽孢杆菌芽孢菌鉴定API50CHB

4、革兰氏阳性球菌分类革兰氏阳性球菌凝固酶葡萄球菌鉴定APISTAPH触酶-触酶+金黄色萄葡球菌溶血链球菌鉴定APISTREP+-定向试验-在细菌学里最普遍的染色方法革兰氏染色步骤G()G()-染色前，所有细胞是透明的-结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合-乙醇从G()菌体洗脱结晶紫-用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈兰紫色ColorGram2革兰氏染色剂即可用试剂-R1=草酸盐-结晶紫溶液-R2=稳定化卢哥氏-PVP液-R3=脱色剂-R4=番红液技术要点-使用新鲜培养细菌(24

5、-48小时)-脱色过度会使G+菌染成G-ColorGram2染色剂试剂组成R1=240mlx1R2=240mlx1R3=240mlx1R4=240mlx1所有试剂瓶带滴咀于18-25°C储存革兰氏染色液2(ColorGram2)-特性稳定化的碘液PVP(聚氯乙烯吡咯烷酮)可以防止因碘挥发而变质，同时也增强了媒染效果。更容易分别G()及G(-)菌高质量的结晶紫和番红，无沉淀。接解酶试剂-原理-传统方法H2O22H2O+O2接解酶玻片法试管法接触酶试剂容许于平板(包括血平板)上作直接检测组成:-

6、增稠剂:高粘度集中所产生的气泡,防止试剂扩散-Evans兰:兰色使结果更容易阅读-3%H2O2-玻片法-直接在平板上测试接触酶检测试剂接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由于传统方法的易产生假阳性结果，这个试验没有得到充分应用。IDColorCatalase产品规格氧化酶试验-原理:TMPD氧化TMPD氧化酶(TMPD=2甲基一对一苯撑二胺)货号:55922纸片:浸泡饱和TMPD储存:2-8ºC于暗处有效期:1年组成:2x30片小瓶装纸片货号:70460储存:2-30ºC于暗处组成:1个小瓶

7、液体试剂(深紫色)(透明)氧化酶纸片法液体氧化酶试剂试剂方法:-用2个试管载1-2ml无菌水-第一管为阴性对照:加一滴OX试剂-第二管为测试管:加可疑菌落然后再加二滴OX试剂-比较二支管的颜色:阴性对照:透明,浅紫色结果:OX(-):透明,浅紫色OX(+):紫色,深紫色生化鉴定容易使用API结果原理：-生化结果组合跟资料库內的典型条目(Taxa)作出比较-经计算後，鉴定百比率（%Id）＝机会率，指示出不同菌类的比较T值（Tindex）=指示出在同一個菌类的相似程度生化鉴定可靠及具创意的选择

8、最典型生化普菌种XT值资料库生化结果(菌种X)(菌種X)API结果跟据T值及%Id的组合，作出评语：(i)ExcellentIdentification%Id>99.9及T>0.75(ii)VerygoodIdentification%Id>99.9及T>0.75(iii)GoodIdentification%Id>90.9及T>0.25(iv)AcceptableIdentification%Id>80.0及T>0(v)Doubtfulprofile其中一个生化反应出现严重违反典型生化结果AP