选修三 基因工程的基本操作程序.ppt

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1、1.2基因工程的基本操作程序阅读课本P8-15，思考下列问题：3min1、基因工程基本操作的四个步骤？2、获取目的基因的常用方法有哪些?3、一个基因表达载体的组成有哪些物质？分别有什么作用？4、将目的基因导入受体细胞时，受体细胞有哪些？分别用什么方法导入细胞？5、用什么方法检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因？什么方法检测目的基因是否转录出了mRNA？什么方法检测目的基因是否翻译成蛋白质？1、从基因文库中获取目的基因（1）.基因文库基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）基因组文库的构建通过对受体菌的培养而储存基因②cDNA文库的构建-----反转录法目的基

2、因的mRNA单链DNA反转录酶DNA聚合酶双链DNA(目的基因)怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?PCR技术扩增与DNA复制的比较PCR技术DNA复制相同点原理原料条件不同点解旋方式场所酶结果碱基互补配对四种脱氧核苷酸模板、能量、酶DNA在高温下变性解旋解旋酶催化体外复制细胞核内热稳定的DNA聚合酶细胞内的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整个DNA分子2、利用PCR技术扩增目的基因①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：_______________________、_____________

3、__、___________、___________.②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制（或碱基互补配对）目的基因DNA四种脱氧核苷酸一对引物Taq聚合酶指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的______

4、__。氢键单链DNA双链DNA链二、基因表达载体的构建——基因工程的核心1、目的：所需物质：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。三将目的基因导入受体细胞（一）转化：方法导入植物细胞导入动物细胞导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射法——感受态细胞吸收DNA分子目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定表达动物受精卵农杆菌转化法植物细胞植物组织培养转基因植物Ca2+处理微生物发酵目的基因的表达产物显微注射胚胎移植转基因动物原理：Ti质粒上的T-DNA可以转移到

5、受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。用Ca2+处理细胞感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子导入微生物细胞原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少过程：四、目的基因的检测与鉴定检测：是否插入基因是否转录是否翻译-----DAN分子杂交-----分子杂交-----抗原-抗体杂交归纳步骤归纳步骤个体生物学水平鉴定归纳:基因工程的基本操作程序获取目的基因从基因文库利用PCR化学方法人工合成构建基因表达载体目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点将目的基因导入受体细胞农杆菌转化法、显微注射法目的基因的检测与鉴定DNA分子杂交、分子杂交、抗原-抗体杂交197

6、0年，特明和巴尔的摩证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解回答下列问题：例1(1)催化①过程的酶是________；核酸酶H的作用是________。(2)③过程也称为DNA的变性，此过程在温度高达90～95℃时才能完成，说明DNA分子具有________性。逆转录酶分解RNA稳定(3)由图中信息分析可知，催化②⑤过程的酶都是________，两者在作用特性上的区别是_____________________________。(4)如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，

7、则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶________个。DNA聚合酶催化⑤过程的酶耐高温60(2011年高考海南卷)回答有关基因工程的问题：(1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。例2平相同(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用