微生物的实验室培养(新课).ppt

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1、课题1微生物的实验室培养专题2:微生物的培养与应用一、培养基作用、种类二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基四、纯化大肠杆菌主要内容课题1微生物的实验室培养微生物的实验室培养条件：（1）为培养的微生物提供合适的营养和环境条件（2）确保其他微生物无法混入研究和应用微生物的前提防止杂菌入侵，获得纯净的培养物微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定

2、形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征因种而异芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.一、基础知识：（二）培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等，液体培养基常用于发酵工业。（

3、2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型和用途液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长固体培养基：菌落，菌苔加入青霉素的培养基:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:分离金黄色葡萄球菌几种选择培养基举例：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物加入唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细菌加入高浓度食盐的培养基:不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、

4、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。二、无菌技术1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是稀释涂布平板法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。（１）消毒定义：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）2.消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程。灭菌消毒技术是微生物有关

5、工作中最普通也是最重要的技术。1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒……(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(2)灭菌的方法：最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别

6、是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。P15-16旁栏思考培养基的配制原则①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和

7、配制量。②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：（根据微生物生长时对营养物质的需求）物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.称量准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。三、实验操作思考：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有几种营养成分？牛肉膏提供上述哪几种成分？3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉