hbvcccdna及其意义.ppt

《hbvcccdna及其意义.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、HBVcccDNA及其意义贵州省人民医院感染科汤正明2006-08-1512006.08.15感染科2006-08-152临床上我们常常遇到以下问题：慢性乙肝难以治愈抗病毒治疗过程中常常发生药物耐受抗病毒治疗后容易复发分子生物学研究表明，HBVcccDNA在病毒持续感染、抗病毒治疗后的再度活跃复制以及药物耐受方面起着至关重要的作用。现就HBVcccDNA——乙肝病毒共价闭合环状DNA的研究进展进行简单的阐述。这是我的学习汇报，希望各位专家批评指正。感染科为什么？2006-08-153一、HBV感染初期cccDNA的形成二、HBVcccDNA的稳定性三、核苷类似物不能阻止初始

2、cccDNA的形成四、HBVcccDNA检测方法五、慢性乙肝患者cccDNA检测的意义六、如何清除HBVcccDNA？七、cccDNA在抗病毒治疗研究中的应用前景一、HBV感染初期cccDNA的形成HBVcccDNA存在于肝细胞核内，是病毒成功感染肝细胞的标志，也是慢性乙型肝炎持久存在的关键。其形成过程包括：HBV颗粒与肝细胞膜接触，被细胞以内吞作用摄入，病毒脱壳后核壳体向肝细胞核转移，释放松弛的环状DNA（relaxecircularDNA,rcDNA)进入细胞核。2006-08-154感染科2006-08-155rcDNA的正链在DNA聚合酶作用下进一步延长形成全长的r

3、cDNA，正负链末端各自连接并构象发生改变形成cccDNA，最后在核小体内组合形成非整合状态的微型染色体。感染科2006-08-156细胞核内的cccDNA作为复制模板转录前基因组RNA和其他基因的mRNA。前基因RNA被转运至胞浆，与病毒核心蛋白以及P蛋白组装成核壳体。病毒DNA聚合酶具有逆转录酶活性，以前基因组RNA为模板逆转录子代DNA，核壳体成熟。感染科2006-08-157成熟的核壳体有两个去向：①部分再进入细胞核重新形成cccDNA，不断补充核内cccDNA池；②部分进入内质网与病毒蛋白组装成病毒颗粒向细胞外分泌，感染新的肝细胞。病毒cccDNA的产生也有两个途

4、径，既可由肝细胞内已有的病毒在复制周期中产生，也可由新感染的肝细胞产生。如图所示。感染科2006-08-158感染科2006-08-159感染科HBV复制过程2006-08-1510感染科2006-08-1511复制方式：HBV吸附cccDNA转2.1KbmRNA外衣壳蛋白录内衣壳蛋白3.5KbmRNA（前基因组）反转录HBVDNA负链复制+DNA组装与释放感染科2006-08-1512动物实验证实，处于稳定感染的肝细胞内大约有30-50个cccDNA拷贝。对慢性乙型肝炎患者肝组织内cccDNA实时定量检测，平均每个感染细胞含有33拷贝，与动物实验结果相符。稳定感染的肝细胞

5、核内cccDNA一般维持在一定水平，既满足病毒复制需要，又不对细胞产生毒性。感染科2006-08-1513这一调节机制通过病毒胞膜蛋白负反馈机制来实现，前C区蛋白发生变异可导致cccDNA大量扩增，并引起细胞死亡。cccDNA的稳定对维持细胞的长期感染状态起决定作用。感染科2006-08-1514cccDNA和rcDNA在结构和理化特性上有3点不同：1.rcDNA在正链与负链上均有缺口或缺刻，只是部分区域互补才能形成环状结构，但非超螺旋结构，而cccDNA两条链均是完整的，两者共价互补，形成超螺旋结构。感染科2006-08-15152.rcDNA能与蛋白共价结合，cccDN

6、A则不能。3.由于缺口或缺刻的存在，rcDNA可以被一些核酸酶降解成核苷酸或单核苷酸，而cccDNA则由于是超螺旋且双链结构均完整，一般不会被上述酶降解。感染科二、HBVcccDNA的稳定性对HBVcccDNA半衰期的认识来自动物实验。核苷类似物可以抑制胞浆内病毒DNA的逆转录，从而阻断胞浆内病毒DNA进入细胞核内再形成cccDNA，使人们可以在动物实验模型中研究cccDNA半衰期。2006-08-1516感染科2006-08-1517Addisson研究发现，拉米夫定、双脱氧鸟苷前体联合抗病毒治疗能有效抑制DHBV的复制，1周后斑点杂交法检测表明，血清DHBVDNA下降至

7、检测水平以下，肝组织中cccDNA呈指数下降，其半衰期为35-57天。感染科2006-08-1518Moraleda等通过土拨鼠原代细胞抗病毒研究结果显示，cccDNA的半衰期很长，其清除依赖于感染细胞的死亡。但是也有相反的报道。尽管用人的原代肝细胞感染HBV，可以观察到cccDNA的合成和缓慢增加，但到目前为止还没有原代人肝细胞中cccDNA的半衰期的报道。感染科三、核苷类似物不能阻止初始cccDNA的形成Delmas等研究发现，阿德福韦能降低培养细胞内DHBVDNA(包括cccDNA)水平，说明病毒感染后起始