大鼠(Rat)丙二醛(MDA)ELISA试剂盒说明书.pdf

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1、取上清。5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断自备物品大鼠（Rat）丙二醛（MDA）ELISA检测试剂盒1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL使用说明书3.37℃恒温箱检测原理操作注意事项试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的预先包被丙二醛（MDA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标

2、准品、浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在后再使用。过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保色。颜色的深浅和样品中的丙二醛（MDA）呈正相关。用酶标仪在450nm存。波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明样品收集、处理及保存方法书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细

3、4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心5.所有液体组分使用前充分摇匀。地分离。2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μ名称96孔配置48孔配置备注L；微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白

4、孔不标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无加。检测抗体-HRP10mL5mL无4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅底物B6mL3mL无或恒温箱温育60min。终止液6mL3mL无封板膜2张2张无5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去说明书1份1份无洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.

5、3、0.6、1.2、2.4、4.8nmol/mL6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。试剂的准备7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤OD值。缓冲液加19份的蒸馏水。结果判断洗板方法绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。本浓度值。2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，

6、浸泡1min，洗板5次。操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。上海笃玛生物科技有限公司免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2.灵敏度：最低检测浓度小于0.1nmol/mL。3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6.有

7、效期：6个月上海笃玛生物科技有限公司FORRESEARCHUSEONLY.Plasma-CollectplasmausingEDTAorheparinasananticoagulant.CentrifugeNOTFORUSEINDIAGNOSTICPROCEDURES.samplesfor30minutesat3000×gat2-8℃within30minutesofcollection.Storesamplesat-20℃or-80℃.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.Ratmalondialchehyche(MDA)E