高效液相色谱定性定量分析方法.pdf

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1、高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法郭瑞臣山东大学齐鲁医院临床药理研究所2009-8-26色谱定性定量分析色谱定性定量分析`色谱分析的目的对未知组分进行定性分析对已知组分进行定量分析`根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该色谱峰在检测器上的响应强度，对该谱峰初步定性和定量分析定性分析定性分析定性分析定性分析定性分析定性分析定性分析定性分析`利用保留值定性最基本的方法；基本依据是两个相同的物质在相同的色谱条件下应该有相同的保留值；但相反结论却不成立，即相同色谱条件下，具有相同保留值的两个物质不一定是同一个物

2、质。尚需一些辅助技术`利用两谱联用定性；其他方法定性定性分析定性分析定性分析定性分析————保留值定性保留值定性1已知物保留值直接对照法定性`未知峰保留值(t’R或V’R)与某标准物完全相同，可初步确定为同一物质`改变色谱柱或流动相组成，二者保留值仍完全相同，则可认定为同一物质`优点：简单缺点：适用范围窄；必须有标准物质定性分析定性分析定性分析定性分析————保留值定性保留值定性例：Agilent1100SeriesHPLC仪;氨脒标准品AgilentZorbaxExtend-C柱18120000未知化合物(4.6mm×2

3、50mm,5μm);100000流动相：乙腈－水－三乙胺80000(60：40：0.2，V/V/V）；60000紫外检测波长265nm；40000流速0.7mL·min-1；20000进样量10μL;005min柱温：室温定性分析定性分析定性分析定性分析————保留值定性保留值定性2利用文献保留值数据进行比对定性`文献报道的保留值数据只能作为定性参考`液相色谱柱填柱技术复杂，重现性差；条件不允许，难以得到相同色谱条件（仪器、色谱柱、试剂等）`可根据文献数据和对照品选用已知标准物，再用已知标准物进行定性定性分析定性分析定性分

4、析定性分析————保留值定性保留值定性3利用已知物增加峰高法定性将已知标准物质加到待测样品，若某一峰增高，且改变色谱柱或流动相组成后仍能使该峰增高，则可基本认定该峰与已知标准物为同一物质定性分析定性分析定性分析定性分析————保留值定性保留值定性4用三维图谱检测器定性`如果HPLC仪配备有三维图谱检测器，除比较未知组分与已知标准物保留时间外，还可比较两峰的立体构形`二极管阵列检测器可同时比较保留时间和紫外光谱图。如果两项均一样，则可基本上确定为同一物质；如果保留时间一样，而紫外图谱有较大差别，则判定两者不是同一物质例：丹皮

5、酚标准品六味地黄丸0.200.150.150.10-21.9020.10x-21.894AUdpfAU0.050.050.000.005.0010.0015.0020.0025.005.0010.0015.0020.0025.00MinutesMinutes0.250.200.200.150.150.10AU0.10AU0.050.050.000.00300.00300.0010.0020.0010.0020.00MinutesMinutes定性分析定性分析定性分析定性分析————两谱联用定性`如果标准物质缺乏或难以获得；

6、或由于结构、理化性质相似，很多物质具有十分接近，甚至相同的保留值，则保留值定性准确度存在疑问`红外光谱、紫外光谱、核磁共振波谱和质谱对有机化合物有很强的定性能力，可用于定性`HPLC-紫外光谱已作为液相色谱的常规检测器使用；HPLC-MS和HPLC-NMR也十分成熟定性分析定性分析定性分析定性分析————两谱联用定性1色谱-质谱联用（HPLC-MS）`质谱属于液相色谱的广适性检测器`普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位保留值定性，对未知化合物无能为力`高效液相色谱—质谱联用可对未知化合物做多级质谱分

7、析，通过多级质谱碎片推测未知化合物结构，进而准确定性定性分析定性分析定性分析定性分析————两谱联用定性`1983年开发串联质谱技术问世，发展十分迅速，已被作为成熟技术，广泛用于许多领域，特别是药学领域，并发挥了巨大作用`中药及植物药化学成分的快速筛选；中药品种、道地药材的鉴别；中药质量标准研究；药代动力学和药物代谢产物研究；非法掺假；刑事侦察；兴奋剂筛查；环境保护定性分析定性分析—两谱联用定性志愿者口服三苯双脒肠溶片后尿样一级全扫描色谱图x107+TICScanscan-blank.d空白21.510.512345678

8、9101112Countsvs.AcquisitionTime(min)x107+TICScanscan-volunteer2.d药后321123456789101112Countsvs.AcquisitionTime(min)定性分析定性分析—两谱联用定性疑似代谢物峰提取质谱图x106+Scan(8.