Transwell做肿瘤侵袭实验的具体步骤.pdf

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1、Transwell做肿瘤侵袭实验的具体步骤!（1）基质胶准备：将冻存于－80度冰箱的BDmatrigel4度过夜（24h），变成液态；（2）取300ul无血清培养基，加入60ul（或50ug/每室）Matrigel，混匀，（4℃操作，最好在冰浴上），加入上室各100ul（3个室）；放入37℃培养箱中，孵育4-5h（>5h）；此间经常观察，当出现“白色层”时，说明已经变为固态。注释：无血清培养基和基质胶按1：5稀释，每孔加50ul，在37℃培养箱中1-2h。（3）消化细胞，无血清培养基洗3次，计数，配成细胞

2、悬液；（4）用无血清培养基洗Matrigel洗1次；每孔加入100ul细胞悬液；（5）下腔室中加入500ul含有20％FBS条件培养基；（6）37℃培养箱中，孵育20-24h；（7）取出transwell用PBS洗2遍，5%戊二醛固定，4℃；（8）加入结晶紫（0.1%）染色或Giemsa染色（5－10min），室温0.5h，PBS洗2遍，用棉球擦去上表面细胞，显微镜下观察。