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时间:2019-10-25
《三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白的原理》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白的原理 TCA与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀.③随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显.④电泳图谱显示,BSA,HSA单体谱带有较明显的展宽现象,这可能是由于TCA的结合,使SDS与蛋白质的结合量产生偏差,从而造成蛋白质所带电荷的
2、不均一性,造成迁移率的不一致.我们认为在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时,对于分子质量大的蛋白质,要慎重选择TCA.对小分子量蛋白质的浓缩,采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后,尽量用丙酮彻底抽提TCA;二是样品处理后要尽快进行电泳分析,以免发生聚集及断裂,造成结果分析的不准确.
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