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1、果蔬成分生化分析果蔬成分的分析主要分为四个方面：维生素C含量的测定、总糖和还原糖含量的测定、蛋白质含蜃的测定、过氧化物酶的分析。总体从实验目的、实验原理、实验试剂、实验结果和分析的角度进行分析一.实验目的：1、掌握微量测定维牛索0的方法和技术。2、了解果蔬中维牛素C含量。3、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。4、掌握蛋白质测定的方法和技术。5、了解果蔬中蛋白质的含量。6、了解聚I人j烯酰胺凝胶的制作过程及结构特点。二.实验原理：1.述原型维生素C"J被氧化型2,6-二氯酚靛酚（下面简称染料）所氧化，成为氧化型
2、维生素C。氧化型染料在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。成为还原型后为无色。用氧化型染料来滴定还原型维生素C,当滴至全部还原型维生素C被氧化后，在稍滴一点呈微红色为终点。滴定用去染料量与样品屮还原型维住索"C量成正比。（此法虽简单迅速，但氧化型染料亦能使其他还原型物质氧化，所以有一定缺点。）2.恿酮比色法是一个快速
3、佃简便的定糖方法。其原理：糖类在鮫高温度下对被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与恿酗缩合成蓝色化合物，在620nm处冇最大吸收。多糖为非还原糊，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具
4、启还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。3.考马斯亮蓝法测定蛋口质浓度，是利用蛋口质-染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。考马斯亮蓝G250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm,当它与蛋白质结合后变为蓝色，最人光吸收在595nmo在一■定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋口质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋口质的量
5、。蛋口质和考马斯亮蓝G-250结合，在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1小时內保持稳定。蛋白质-染料复合物具有很高的消光系数,使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，可测微克级蛋白质含量。1.用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离鉴定蛋白质，主要依赖于电荷效应和分了筛效应。再与标准样品对照即对确定各区带的成分。2.在冇过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最人吸收，可用分光光度计测最470側的吸光度变化测定过氧化物酶活性。一.实验试剂：1%草酸溶液、
6、2%草酸溶液、维生素C标准液、氧化型0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液、各种果蔬、蔥酮试剂、标准葡萄糖溶液(0.lmg/mL)、6mol/LHC1溶液、20%NaOII溶液、标准蛋白质溶液、考马斯亮兰G-250染料试剂、0.05mol/LTris-IICl缓冲液(pH6・8)、0.1mol/L磷酸缓冲液PH7.6、反应混合液。二.实验结果及分析：1•果蔬中维生素C的定量测定操作：1、制备新鲜果蔬液：如洗净新鲜橘子，擦干表而水分，剥去外皮，称20.0g橘子放入50mL量筒中，加2%草酸液至40mL刻度处(即稀释1
7、倍)。用玻璃棒搅拌，静置10分钟,过滤，滤液即是(若样品屮含人量铁，可用8%醋酸溶液提取，可在一定程度上延缓Fe”还原染料)。2、染料液装入滴定管中：应驱除滴定管中的气泡，调整好零点。3、滴定维生素C标准液：吸取l.OmL维生素C标准液放入锥形瓶中，加9mLl%草酸溶液，摇匀，川染料液滴定至微红色保持15秒不褪色即为终点。记下所川去染料液数量，可算出lmL染料相当于多少mg维生素Co4、滴定样品液：吸取lO.OmL样品液放入锥形瓶小，同上操作进行滴定。可做两份，求平均值。实验结果：Vc标液用去2,6-二氧靛
8、酚0.3ml萝卜：20.06g,定容到40ml,每10ml消耗2,6-二氧靛酚:0.85ml;结果得：每一百克样品屮维牛素C含量VXCxi00=5.99mgW盘菜:21.26g,定容到40ml,每10ml消耗2,6-二氧靛酚:1.0ml;结果得：每一百克样品中维生素C含量m=VXCXI00=6.21mgW结果分析：不同果蔬中的维生素的含量不相同，如盘菜和萝卜中的Vc含量冇差异，造成这种羌异的原因可能是：1.没有将果蔬充分的碾碎，维生素没有完全释放出來，或者一部分残留在实验仪器上；2.在过滤多的吋候，没有过滤
9、完全，存在残渣；3.在移液时，常常把液体从一个容器移到另一个容器中，使实验的误差较大；4.在滴定时，没冇明确液体刚变红的概念，可能滴得太多；5.滴定的时间花费太长，还原性的物质发生了氧化。2.总糖和还原糖含量的测定操作：1、葡萄糖标准曲线的绘制，以吸光度为纵朋标，各标准液浓度(mg/mL)为横朋标做图得标准曲线。2、样品中还原糖的捉取和测定称取lg实验材料，加水约3mL,在研钵中磨成匀浆，转入三介烧瓶中，并用约3
