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1、标准文案各种生物活性物质的保存Experience 2009-08-1616:34:36 阅读336 评论0 字号:大中小 订阅DNA、RNA、蛋白质、抗体和探针的保存方法:(网上搜索,仅供参考^_^)1.DNA 短期保存,两年之内吧,无菌水和TE缓冲液是ok的。如果是长期保存,比如10年20年的话,我推荐你刚提取好的DNA直接保存到乙醇里,放-20°,放10年没问题。需要用的时候,再离心后,弃去乙醇,加水或TE溶解即可。 长期保存用TE,DNA本来就是酸性,所以需要弱碱性环境保存,如果用中性或者酸性环境保存容
2、易降解。保存两年应该会降解的!还是不要超过两年,再一年内都有降解的可能,所以还是要尽快的利用了。做成干粉不太可能,哪里有那么多的量!还是在-80度以下保存吧,也要避免反复冻融。 如果DNA很纯的话,应该影响不是很大啊,有文献报道高纯DNA的最佳保存条件是4度,你也可以应证一下你的DNA有没有降解啊,跑个电泳看看啊,如果出现smear,就不要用了啊! 提纯的DNA放在4度一段时间(数周-数月)都没问题。但是长期保存建议-20度,并且浓度不要稀释的太低,否则容易降解。 大全标准文案2.RNA RN
3、A若要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。 保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染,从富含RNase的样品(如胰脏、肝脏)中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA,对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA,在水中贮存一个星期就基本降解了,而从大鼠脾脏中提取的RNA,在水中保存3年仍保持稳定。另外,长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性,可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中,存
4、于-70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。当准备使用RNA时,可以使用下列方法沉淀RNA:加入NaAc至0.3M,12,000×g离心5分钟。 RNA即使是放在-80度下也会降解,所以最好的保存方法是将RNA逆转成cDNA后保存。 提取的RNA保存在DEPC处理的水中,加入RNAse抑止剂,在-80度保存2个月,应该是可以保证不降解的。最好是反转录后保存。 大全标准文案一旦生物样品被收集采摘,离体组织的RNA会立刻变得非常不稳定,极易被降
5、解。由于特异及非特异的RNA降解,或者由于样品采集过程中的应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片、基因表达矩阵分析(ArrayAnalysis)、定量RT-PCR等实验来说,采样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态,是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。记得以前学植物遗传的同学常常要带着液氮罐,骑着单车到田里采样——那个液氮罐的盖子有点问题,一颠就冒白烟,吓得一路上行人、车辆纷纷躲避,很是招摇,据说有一次觉得液氮不够了,赶着坐出租回来,那可是连哄带骗才上了的士,到学校时司机已经紧张得面无人色
6、了——这真令贪玩的我们非常羡慕,只恨这等趣事怎么就落不到我们头上。对当事人来说,每周一次带着液氮罐到处跑实在不算一种有趣的经历。没有办法,为了保持样品的RNA完整真实,要么当场提RNA,要么液氮保存,一直如此。不过自从有了RNAlater,这种有趣的场面就会越来越少了。 RNAlater是特殊的样品储存液,只要在采样后立即将新鲜样品浸入这种液体试剂,RNlater可以迅速渗透到组织或其他生物样本中,稳定并保护RNA完整而不被降解,确保下游分析得到的数据真实反应样品的表达信息。样品储存液中保存的新鲜样品可以在不超过37度的
7、高温天气下保存一天,或者在25度室温下保存一周;或者4度冰箱存放一个月;或者负20度长期保存而使RNA保持完整免受降解。这种技术为在不同温度和不同地点下的采样、运输和保存样品提供了极大的方便,同样适合手术/解剖过程中部分样品的保存。 大全标准文案RNAlater的用法非常简单,只要在采样后立即将样品完全浸入适量(10ul/1mg组织或者5倍体积)的RNAlater中即可。取样的动作要尽量快速利索,组织样品的大小以厚度不超过0.5公分为宜。对于一些小的组织如小鼠的脾、肾等器官则可以整个取出浸入溶液中,较大的则应切开为厚度小于0
8、.5公分的小块,以确保RNAlater能迅速扩散渗透入组织块中的所有细胞中。采样的容器应该足够大以容纳10倍于组织重量的溶液,避免组织块挤在一起,同时建议将溶液加满容器以避免在运输过程中组织块露出液面。 保存在RNAlater中的样品RNA可以:·37℃下稳
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