鮸鱼Vibrio ponticus的分离鉴定【开题报告】

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1、毕业论文开题报告水产养殖鮸鱼Vibrioponticus的分离鉴定一、选题的背景与意义鮸鱼（音miǎn），一作米鱼，形似鲈鱼，但肉质略粗糙，体色发暗，灰褐并带有紫绿色，腹部灰白。背鳍鳍棘上缘黑色，鳍条部中央有一纵行黑色条纹。胸鳍腋部上方有一晴斑。其余各鳍灰黑色。鮸鱼体形为两侧扁平向后延长状，背、腹部浅弧形。鮸鱼分布于北太平洋西部，包括中国的渤海、黄海及东海，朝鲜和日本南部。中国沿海主要产鮸鱼的渔场有：广东潮汕鱼场福建平潭岛和兄弟岛，浙江岱山和舟山群岛，江苏大沙渔场，山东沿海和渤海，尤以东海的舟山群岛产量最大，是宁

2、波一带的海渔特产之一。鮸鱼的主要捕捞方法为底拖网或延绳钓，冬春之际产量较高。每年农历6一8月为舟山群岛鮸鱼的渔汛期，渔汛期鮸鱼以春季生殖洄游和冬季越冬洄游为主，7月为旺汛。每逢大潮汛，渔船竞相出海作业，晨出晚归，捕获甚丰。鮸鱼肉味鲜美，为海产经济鱼类之一，也是经济价值较高的鱼类。除鲜食外，肉是作鱼丸、敲鱼面的上等原料，在温州颇有盛名；全鱼还可制作罐头或加工成鮸鱼鲞；鱼鳔可制鱼胶，有较高的药用价值，具养血、补肾、润肺健脾和消炎作用；鱼鳞可制鳞胶；内脏、骨可制鱼粉、鱼油；耳石有清热去瘀、利尿的作用。鮸鱼还是我国的出口

3、鱼类品种，每年通过浙江、上海、江苏、辽宁等出口口岸大量输往日本、香港、澳门等国家和地区。鮸鱼性甘、咸、平，有养血、止血、补肾固精、润肺健脾和消炎功效。对治疗再生障碍性贫血，吐血，肾虚遗精，疮疖、痛肿、无名肿毒、乳腺炎等有效。鮸鱼的耳石有清热去瘀、利尿的作用；鮸鱼鳔俗称“鮸鱼胶”或“鳘肚”，具有养血、补肾、润肺健脾和消炎作用；采用鮸鱼鳔，与当归、红枣适量煎汤，长期坚持食用，对再生障碍性贫血有一定疗效。鮸鱼鳔与等量的酒和水炖食，可治疗男子遗精和女子白带。Vibrioponticus是弧菌属的一员，2004年发现的一个

4、新种。在鱼类弧菌病前期研究中，溶藻弧菌、创伤弧菌、鲨鱼弧菌、哈维氏弧菌等是危害鱼类生长的重要病原，主要导致鱼体表溃疡或是烂身、烂鳃。近2年出现的Vibrioponticus病的主要症状同以往不同，主要表现为：病鱼离群独游，体色发黑或体表粘附大量黄色物质，体表正常，无溃烂症，肝偏白，鳃偏白，有一定的失血症状，肠空，部分鱼肠有脓液，无味。该菌可感染幼鱼，也可感染2龄以上的鱼，发病急，一般在1周内死亡50－80％，死亡1周后鱼死亡变缓，逐渐稳定。发病一般在春、秋2季，水文变化较多的季节。Vibrioponticus也可

5、感染日本海鲈（Lateolabraxjaponicus），但症状不同，可使日本海鲈体表溃疡和肝损伤。治疗：1、由于Vibrioponticus病发生时，鱼已拒食，可重点对尚可摄食的鱼进行重点预防，用终浓度0.2ppm的氟苯尼考或0.4ppm的恩诺沙星拌饲投喂，连用3天，有较好的预防效果。意义：通过此次试验，可以研究引起鮸鱼病变的细菌并把它进行分离鉴定，为下一步的治疗等研究做准备。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：研究的基本内容：本实验主要是对引起鮸鱼致病的病菌进行分离，采用了TCBS平板分离优势菌；采用了回归

6、感染试验确认病原菌，采用改进的寇氏法计算LD50;采用形态学观察，生理生化特征测定，细菌特异性引物PCR扩增检测及细菌16SrRNA序列分析鉴定细菌；采用药敏试验测定它对部分抗生素的敏感性。拟解决的问题：研究引起鮸鱼病变的细菌并把它进行分离鉴定。三、研究的方法与技术路线：（一）研究方法本实验主要是对引起鮸鱼致病的病菌进行分离，采用了TCBS平板分离优势菌；采用了回归感染试验确认病原菌，采用改进的寇氏法计算LD50;采用形态学观察，生理生化特征测定，细菌特异性引物PCR扩增检测及细菌16SrRNA序列分析鉴定细菌；

7、采用药敏试验测定它对部分抗生素的敏感性。1.1材料1.1主要试剂和仪器：T4DNA连接酶、pMD19-T载体和ExTaqDNA聚合酶等均购自Takara公司；UNIQ-10柱式胶回收试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司；其余药品试剂均为进口分析纯。药敏纸片购自杭州天河生物制药厂。离心机（MICROCL19型）购自ThermoElectron公司，PCR仪（Mastercyclepereonal型）购自Eppendorf公司，恒温震荡器（HZ-9211K型)购自太仓市科教器材厂。1.2样品：选取症状典型的濒死病鱼。

8、1.3引物：采用已报道的细菌16SrRNA基因通用扩增引物和部分弧菌科成员鉴定引物，进行PCR扩增验证。引物合成由上海英骏生物技术有限公司完成。2．病原菌的分离：无菌条件下取病鱼体表溃疡、肝、脾、肾等部位作为材料，用普通营养琼脂和TCBS平板做细菌分离，置28°C培养24h。结果从被检材料中分离到纯度一致的菌株，命名为鮸鱼病原菌,纯培养后-70W保存备用。3．菌体形态观察