曼氏无针乌贼凝集素基因关键结构域重组子的构建【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）曼氏无针乌贼凝集素基因关键结构域重组子的构建目　录摘　要Abstract1引言11.1曼氏无针乌贼11.1.1曼氏无针乌贼病害研究现状11.1.2无脊椎动物的免疫防御机制11.2凝集素11.2.1凝集素的分布与分类21.2.2凝集素的结构21.2.3凝集素的作用22实验材料及仪器42.1主要化学试剂42.2仪器设备42.3实验材料及其处理43实验方法53.1实验用品的预处理53.2曼氏无针乌贼总RNA的提取53.3曼氏无针乌贼cDNA文库的构建53.4序列分析与目的基因片段的获得53.5编码凝集素基因成熟肽DNA的扩

2、增和验证53.5.1PCR产物的回收纯化63.6感受态细胞的制备、连接及转化63.6.1感受态细胞的制备63.6.2感受态细胞的连接73.6.3感受态细胞的转化73.7序列比较与系统进化分析73.8重组表达载体的构建73.9重组表达载体转化宿主菌84实验结果94.1曼氏无针乌贼总RNA的提取94.2序列分析与目的片段（EST）的获得94.3关键结构域重组子构建104.4凝集素基因的同源性分析104.5凝集素基因的进化分析124.6重组质粒DNA的酶切125讨论与总结14参考文献15致谢17【摘要】曼氏无针乌贼是我国重要的水产经济动物，近年来养

3、殖规模不断扩大，产量持续增加。随着养殖规模的扩大以及养殖环境的日益恶化而导致了大量疾病的发生，严重制约了曼氏无针乌贼养殖业的健康发展。可见，疾病的控制与预防对曼氏无针乌贼养殖业的可持续发展具有举足轻重的作用。研究表明，曼氏无针乌贼是依靠由细胞免疫和体液免疫构成的固有免疫系统来对病原进行识别和清除的。所以，固有免疫机制的研究有助于推动曼氏无针乌贼病害防治工作的开展。本实验在提取曼氏无针乌贼总RNA的前提下，构建了cDNA文库，并根据凝集素基因EST序列进行了凝集素结构域的预测，1—29位氨基酸为其信号肽结构，36—264位氨基酸为其结构域部分。

4、对所得到的结构域进行重组子的构建，并成功实现了重组载体对大肠杆菌DE3的转化。【关键词】曼氏无针乌贼；固有免疫；凝集素；重组子【ABSTRACT】TheCuttlefishSepiellamaindroniisoneofthemostcommerciallyimportantnativespeciesforaquacultureindustryinChina.Withtheexpansionoffarmingandthefarmingenvironmenthasledtothedeteriorationofalargenumberofdise

5、ases,severelyrestrictedthesquidManneedlehealthydevelopmentofaquaculture.Visible,diseasecontrolandpreventionofneedle-freesquidManthesustainabledevelopmentofaquacultureplaysanimportantrole.ResearchshowsthatcuttlefishManneedleistorelyonthecellularandhumoralimmunitytotheinnatei

6、mmunesystemconsistingoftheidentificationandremovalofpathogens.Therefore,mechanismsofinnateimmunitymansonihelptopromotediseasepreventionandtreatmentwithoutneedlessquidwork.Inthepresentstudy,lectindomainwaspredictedaccordingtolectingeneESTsequences,1-29aminoacidstructureisits

7、signalpeptideandaminoacids36-264partisitsdomain.Theconstructionofrecombinantwasworkedoutonthebasisofthedomain.AndfinalytoachievethetransformationoftherecombinantvectorinE.coli.【KEYWORDS】Sepiellamandroni；innateimmune；lectin；recombinant19引言1.1曼氏无针乌贼曼氏无针乌贼（Sepiellamaindroni），俗

8、名:花粒子、麻乌贼、血墨。隶属于软体动物门、头足纲、十腕目、乌贼科（唐逸民等，1991）。曼氏无针乌贼生殖群体密集，年产量4～5万吨（2007中国渔业统计年鉴），主