镉胁迫对香鱼肝蛋白质组学的影响【开题报告+文献综述+优秀毕业设计】

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1、本科毕业论文系列开题报告水产养殖镉胁迫对香鱼肝蛋白质组的影响一、选题的背景与意义香鱼（Plecoglossusaltivelis）系鲑形目、香鱼科、香鱼属，一年生洄游性鱼类，俗称油香鱼，为我国重要的小型名贵经济鱼类，随着工业的快速发展，我国多个水域环境重金属镉污染日益严重，香鱼作为浙江省重要经济鱼类产量受到严重影响。现有的生物监测技术侧重于研究各类生物有机体对重金属的富集量和表达单一蛋白质指示物的规律，而蛋白质双向凝胶电泳有助于更为全面的分析镉胁迫对香鱼肝组织蛋白质组学的影响（黄清育等,2008）。在区分野生鲟鱼、养殖鲟鱼以及

2、腌制鲟鱼（MartinezIetal.2007），急性镉胁迫牙鲆鳃组织蛋白的变化及脑组织运铁蛋白含量的变化(ZhuJYetal,2006;LingXP,2009)，中华绒螯蟹急慢性镉胁迫下前鳃蛋白质变化(SilvestreFetal.2006)，镉胁迫下大黄鱼肝组织中运铁蛋白和铁调素基因表达的变化(ChenJ,2008)，以及不同盐度胁迫下香鱼载脂蛋白含量的变化(ChenJ,2009)等方面进行过基于双向电泳技术的蛋白质组学研究。加之原子吸收光谱法由于具有灵敏度高，应用成熟以及相对便宜等优点，是目前测定重金属含量最主要的方法，

3、在重金属元素分析中得到了广泛的应用。因此，本课题拟将通过双向凝胶电泳实验从蛋白质组的角度了解镉胁迫对肝组织蛋白质的影响，优化分离受氯化镉污染前后香鱼肝蛋白质组，构建差异蛋白质组的电泳图谱，其技术可为今后连续监测流动水体中各类重金属污染程度及危害性提供可行性分析技术。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：研究基本内容：1.一定浓度镉胁迫下香鱼肝组织蛋白质表达量的变化2.找出并分析香鱼在镉胁迫下肝组织中差异明显的蛋白质点3.对差异表达蛋白斑点进行质谱分析，并进一步生物信息学分析4.初步探讨鱼体肝组织蛋白在应对镉胁迫时的解毒生理机理

4、。拟解决的主要问题：构建香鱼肝组织蛋白质双向凝胶电泳的条件，为环境监测提供理论依据，以及为鱼类安全食用提供参考价值。三、研究的方法与技术路线：（一）研究方法1镉胁迫样品处理：镉胁迫浓度设置梯度为5mg/l，试验时间为24h。购买市售香鱼于实验室中暂养7天以上，以适应实验室驯养环境。分组实验，设对照组和实验组，设平行组，每组14尾。实验用水用塑料箱蓄自来水70L，并使用空气压缩机连续暴气三天。实验条件为自然光照，水温20℃±1℃，pH7.73左右。24h后取解剖香鱼取出肝脏，立刻投入液氮中暂存，后期分类整理好放入-70℃冰箱中保

5、存。2肝组织蛋白双向电泳：参考吴海庆（2009）方法进行香鱼肝组织蛋白质的双向电泳实验。液氮碾磨法提取蛋白，分别进行第一向IEF等电聚焦实验和第二向SDS-PAGE电泳，用考马斯亮蓝染色液对SDS-PAGE胶进行染色，并对脱色后的凝胶进行扫描并采集图像，利用PDquest分析软件分析实验组和对照组胶，并筛选出差异大的蛋白点。3差异蛋白的鉴定及分析：将差异蛋白质点的进行筛选并切胶送往质谱公司进行串联质谱(LC-MS-MS)分析或肽指纹图谱(MALDI-TOF-MS)分析，通过蛋白质数据库搜索鉴定差异表达蛋白斑点并进行生物信息学分

6、析，初步探讨鱼体肝组织蛋白在应对镉胁迫时的解毒生理机理。（二）技术路线：购得健康香鱼，暂养，镉胁迫实验收集实验组、对照组香鱼组织撰写论文提取肝组织蛋白质双向凝胶电泳选取差异蛋白质谱分析鉴定蛋白数据处理与分析论文答辩查找资料，写开题报告和综述综述仪器、药品的购买和各种实验材料的准备四、研究的总体安排与进度：2010.2-2010.3毕业论文选题。2010.3-2010.10进行文献查阅和资料收集，制定具体研究计划和试验方案。2010.4-2010.6亲体的购买、暂养、镉胁迫处理。2010.6-2010.7将两组香鱼肝脏进行双向电

7、泳分析，取差异表达蛋白斑点进行质谱分析。2010.7-2010.10数据和材料整理、分析，查阅相关蛋白的文献2011.2-2011.3完成2篇外文翻译，2011.2-2011.4论文撰写、提交并答辩。2010.5.9开题答辩。五、主要参考文献：[1]PenningtonSR,WilkinsMR,HochstrasseDF,etal.Proteomeanalysis:fromproteincharacterizationtobiologicalfunction[J].TrendsinCellBiology,1997,7(4):1

8、68-173.[2]曾嵘,夏其昌.蛋白质组学研究进展与趋势[J].中国科学院院刊,2002,(3):166-169.[3]ShepardJL,BradleyBP.ProteinexpressionsignaturesandlysosomalstabilityinMytilus