猕猴桃细菌性溃疡病菌检疫技术操作办法

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1、猕猴桃细菌性溃疡病菌检疫技术操作办法字体：大中小  2009-9-1  来源：省林检局  阅读：160次  [关闭]1主题内容及应检范围1.1本办法规定了猕猴桃细菌性溃疡病菌Pseudomonassyringaepv.actinidiaeTakikawaetal.的检疫检验及检疫处理操作办法。1.2本办法适用于林业植物检疫机构对猕猴桃属Actinidiaspp.植物活体、残体的检疫检验和检疫处理。2产地检疫2.1种苗繁育基地的建立2.1.1培育的猕猴桃，应从无病区采集接穗，或用无病虫的当年生半木质枝条作插条。2.1.2加强晚秋

2、水、肥管理，避免在强风和冬季低温的高海拔区，即易发生霜冻的地方建园。2.2踏查2.2.1在种苗繁育基地、猕猴桃栽植地的果园、林场，以自然界线、道路等为单位进行线路（目测）踏查。2.2.2调查寄主的主干及分枝上部是否有淡黄色或黄褐色病斑；病斑处是否有小孔，从中向外流出白色或铁锈色液体，病部下方形成深褐色污斑。2.2.3调查枝条上是否有暗绿色或暗褐色水渍状纵向、线形龟裂；新梢是否呈暗褐色萎蔫枯死，病部浸出白色水渍状液体。2.2.4调查叶片上是否有红色小点，或大小为2–3mm的褐色多角形病斑，周围有明显黄色水渍状晕圈，叶片向里或向外

3、翻卷。2.2.5确认有疫情需进一步掌握危害情况的，需设标准地（或样方）做详细调查。2.3标准地（或样方）调查2.3.1种苗繁育基地样方设置与调查2.3.1.1样方的累积面积应不少于调查总面积的5%。2.3.1.2每块样方面积为0.1hm2，采取棋盘式取样法，抽取样树5–10株，进行病害分级调查。2.3.2.果园标准地设置与调查2.3.2.1按果园面积设置，10hm2以下（含10hm2）设1块，每增加5hm2增设1块。2.3.2.2每块标准地面积为0.1hm2，采取棋盘式取样法，抽取样树10株，进行病害分级调查。2.4病害分级标

4、准单株病害分级标准Ⅰ级全株叶、蔓无病代表值0；Ⅱ级1–20片叶和1个侧蔓发病，或1/3以下的新梢发病代表值1；Ⅲ级21–30片叶和2–3个侧蔓发病，或1/3–1/2的新梢发病代表值2；Ⅳ级31片以上叶和1–2个主蔓发病，或1/2以上新梢发病代表值3；Ⅴ级主干发病1/3，或多数侧蔓发病、植株部分枯死代表值4；Ⅵ级主干发病1/3，或全部主蔓枯死发病、全株枯死代表值5。果园病害分级标准（以被害株率为标准）轻被害株率10%以下；中被害株率11%–30%；重被害株率31%以上。2.5所采集的感病材料应包含植物的所有部分和各种症状部分。应

5、尽可能采集感病初期的病株部分，以利于病原细菌的分离。2.6样品置于聚乙烯袋内或其它合适容器内保鲜和防止污染。样品应冷藏存放，避免受到阳光的照射。3调运检疫3.1抽样比例3.1.1苗木100株以内（含100株）的应全部检查；100–1000株按10%抽取；1000株以上按一批货物总件数（株）的5%抽取。3.1.2植株及植株残体应全部进行检查。3.2抽样方法3.2.1苗木按照抽样比例，采取分层方式设5个样点进行抽样。3.2.2对携带有病症的植株及植株残体应全部进行检查。3.3现场检验3.3.1检查寄主的叶片是否向里或向外翻卷，并有

6、红色小点或多角形病斑，周围有明显黄色水渍状晕圈。3.3.2检查1–2a枝条上是否有水渍状纵向、线形龟裂，新梢是否萎蔫枯死，并有白色水渍状液体溢出。3.3.3检查寄主干部是否在病斑下方呈深褐色并有铁锈色液体溢出。4检疫检验4.1溢菌检验在具典型症状的病部上，取病健交界处的一小块病组织，在显微镜下切片检查是否有大量细菌液溢出。4.2分离培养检验4.2.1取小块病斑组织，经表面消毒，灭菌水洗3次后，研碎静置10min，采用假单孢属选择性培养基进行分离，将分离并经纯化后的细菌移植到BPA培养基斜面上培养48h，置8℃冰箱保存。分离鉴定

7、方法见附录1。4.2.2检查在BPA培养基平板上是否形成污白色、圆形、全缘、凸起、光滑、直径约为1–3mm的菌落；在KBA培养基上未见荧光；在Luisetti培养基上发生蓝色荧光及在SPA培养基上呈粘液状菌落。4.3染色检验4.3.1鞭毛染色采用西萨—基尔染色法。经染媒5–7min→水洗干燥→苯酚品红染色5min→水洗干燥后镜检。显微镜下菌体和鞭毛为阴性反应，呈红色，极生1–3根。4.3.2革兰氏染色采用结晶紫草酸胺染色法。经固定涂片→染色1min→水洗数秒吸干→碘液处理1min→水洗数秒吸干→褪色30s→水洗数秒吸干→复染1

8、0min→水洗吸干后镜检。显微镜下菌体为革兰氏阴性反应，呈红色。4.4生理生化检验4.4.1生长与温度试验菌株生长最高温度为35℃；最适生长温度为25–28℃；致死温度为55℃条件下10min。4.4.2精氨酸双水解酶检验配制Thornley培养基。每试管装3–4ml培养基灭