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1、北京维尚立德生物HO-GS-/-1isderivedfromCHO-K1cell(ATCC),andKnock-outglutamate-ammonialigasegenebyTALEN,thenadapttosuspensionculturewithserumfreeculturemedium. Cho细胞来源：ATCCCHOK1Genotypesequence：CHOGSWT: GSKnock-outgenotype: 5bpMutant: ATTTTGATGGCTCTAGTACCTTTCAGTCTGAGGGCTCCAACAGTG.....TATCTCAGCCCTGTTGCCAT
2、GTWT: ATTTTGATGGCTCTAGTACCTTTCAGTCTGAGGGCTCCAACAGTGACATGTATCTCAGCCCTGTTGCCATGTmycoplasmadetectionresult: 1-5:differentcellwellssample;NC:negativecontrol;北京安必奇生物Knockout基因敲除细胞或动物模型一直以来是开展基因功能研究、寻找合适药物作用靶点的重要工具。CRISPR/Cas系统是细菌的一种适应性免疫机制，用来抵抗各种外来核酸的入侵。CRISPR/Cas9技术与ZFN、TALEN相比，更为高效、便捷，成为基因编辑的一个重要
3、工具，在基因工程领域开创了新纪元。改造优化后的CRISPR/Cas9系统由两部分组成：sgRNA和Cas9蛋白。sgRNA特异性识别靶位点后，Cas9蛋白在靶位点附近进行切割，从而形成DSB。安必奇凭借先进的技术平台、专业的科研团队，将为您提供各种Knockout基因敲除细胞系服务，甚至是难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、神经元细胞等。我们的一站式服务包括：sgRNA设计、筛选高效的sgRNA、敲除载体构建、敲除效率验证等。我们将会在最短的时间内提供给您高质量的单克隆基因敲除细胞系，以及全面的检测报告，包括靶点设计，靶点基因敲除效率检测，克隆筛选及靶基因检测全部过程。技术流程服务内容
4、·靶点设计- 根据目的基因设计相应的靶位点，并构建sgRNA表达质粒。·效率检测- 通过Cruiser™Enzyme酶切及pool细胞测序对设计的sgRNA进行靶点敲除效率检测。·细胞转染- 将cas9和sgRNA质粒转染目的细胞。·克隆筛选- 挑选单克隆细胞，检测细胞基因型。·敲除检测- Cruiser™Enzyme酶切、TA克隆测序、qRT-PCR、Westernblot等。我们的优势·多样细胞种类- 在H1299、2F-2B、4T1、786-O、9607、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、CHO、HepG2等多个种属细胞中成功构建Knockout基因敲除细胞系。·
5、一站式服务- 我们提供从sgRNA设计至敲除结果检测（DNA、mRNA、蛋白水平）的一站式服务，满足客户不同的需求。·各种基因位点- 敲除效率不受靶位点限制。·敲除效率高-敲除效率达到高，且脱靶效率低，达到100%的准确率。应用前景·研究基因的功能及表达调控机制。·构建各种基因突变导致的疾病模型如白化病、阿尔兹海默症、镰刀型细胞贫血症等，从而研究疾病的治疗及诊断方法。·染色体敲除或大片段敲除[1]。·通过设计模版链和同源臂，插入外源基因或修复突变基因，从而进行转基因或突变基因修复实验[2]。·利用Cas9的突变体（dCas9）只能特异性识别结合靶位点，而不能产生DSB的特点，可以进行
6、基因表达调控的研究[3-4]以及甲基化等表观遗传学研究[5]。参考文献[1]HeZ,ProudfootC,MilehamAJ,etal.HighlyefficienttargetedchromosomedeletionsusingCRISPR/Cas9[J].Biotechnologyandbioengineering,2015,112(5):1060-1064.[2]SchwankG,KooBK,SasselliV,etal.FunctionalrepairofCFTRbyCRISPR/Cas9inintestinalstemcellorganoidsofcysticfibrosi
7、spatients[J].Cellstemcell,2013,13(6):653-658.[3]Perez-PineraP,KocakDD,VockleyCM,etal.RNA-guidedgeneactivationbyCRISPR-Cas9-basedtranscriptionfactors[J].Naturemethods,2013,10(10):973-976.[4]GilbertLA,LarsonMH,MorsutL,etal.CRISPR-me
