小鼠p53 (p53-TP53)-ELISA试剂盒说明书

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1、小鼠p53(p53/TP53)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E-EL-M0877（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISAkit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组p53/TP53浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。试剂盒组成：名称-中文名称-英文规格保存条件ELISA酶标板MicroELISAPlate8×12/8×6*4℃冻干标准品Re

2、ferenceStandard2/1支*4℃标准品&样品稀释液ReferenceStandard&SampleDiluent1瓶20mL/12mL*4℃浓缩生物素化抗体ConcentratedBiotinylatedDetectionAb1支120μL/70μL*4℃生物素化抗体稀释液DiluentforBiotinylatedDetectionAb1瓶10mL/6mL*4℃浓缩HRP酶结合物ConcentratedHRPConjugate1支120μL/70μL*4℃(避光)酶结合物稀释液DiluentforHRPConjugate1瓶10mL/

3、6mL*4℃浓缩洗涤液（25×）ConcentratedWashBuffer（25×）1瓶30mL/16mL*4℃底物溶液（TMB）SubstrateReagent1瓶10mL/6mL*4℃(避光)反应终止液StopSolution1瓶10mL/6mL*4℃封板覆膜PlateSealer5/3张*产品说明书ProductDescription1份*:[96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠p53/TP53抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的p53/TP53会与包被抗体

4、结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠p53/TP53抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠p53/TP53抗体与结合在包被抗体上的小鼠p53/TP53结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，p53/TP53浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中p53/TP53的浓度。标本收集:1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管

5、应为一次性的无热原，无内毒素试管。2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破

6、碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测（具体处理方法可参考：http://www.elabscience.cn/news2.asp?tid=477）6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融，1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值

7、，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。试验所需自备物品:1.酶标仪(450nm波长滤光片)2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL,2-20μL,20-200μL,200-1000μL3.37℃恒温箱,双蒸水或去离子水4.吸水纸检测前准备工作:1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。2.将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。3.标准

8、品:加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为4000pg/ml)。然