陈焕程基因工程的基本操作程序

《陈焕程基因工程的基本操作程序》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、1.2基因工程的基本操作程序基因工程基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。（既是概念，又是原理）1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。一、目的基因的获取(一)、目的基

2、因主要是______________________编码蛋白质的结构基因请举出三个以上的例子（二）、获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成请阅读P9第一和二两段一、目的基因的获取（一）从基因文库中直接获取1.基因文库：概念见P92.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类种类基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库3.获取目的基因的根据：见课本P9基因组文库与部分基因文库的关系某生物体内全部DNA许多DNA片段受体菌群体4.基因文库的构建方法限制酶与运载体连接导入基因组文库某种生物某个时

3、期的mRNAcDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入部分基因文库（cDNA文库）5.基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性4)从基因文库中得到目的基因的方法1、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的A、染色体DNA  B、线粒体DNAC、总mRNA  D、tRNA2、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是A、某生物的全套基因就是一个基因文库B、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个生物体内，则这个生物就是一个基因文库C、含有一种生物

4、所有基因的基因文库叫做基因组文库D、含有一种生物的一部分基因的基因文库叫cDNA文库AC①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：_________________________、______________、___________、_______________________②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制已知基因的核苷酸序列（前提）四种脱氧核苷酸一对引物耐热的DNA聚合酶（Taq酶）指数2n使目的基因

5、的片段在短时间内成百万倍地扩增(二)利用PCR技术扩增目的基因⑥过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物处延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链(二)利用PCR技术扩增目的基因PCR技术扩增与DNA复制的比较PCR技术DNA复制相同点原理原料条件不同点解旋方式场所酶结果碱基互补配对四种脱氧核苷酸模板、能量、酶DNA在高温下变性解旋解旋酶催化体外复制细胞

6、核内热稳定的DNA聚合酶细胞内的DNA聚合酶大量的DNA片段形成整个DNA分子目的基因的mRNA单链DNA(cDNA）双链DNA(即目的基因)反转录合成1）反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：（三）人工合成的目的基因4、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是A.5

7、40个B.8100个C.17280个D.7560个B1000个脱氧核苷酸对，即2000个核苷酸。由于A=T=460个，所以，C=G=540个。所以，一个目的基因有胞嘧啶脱氧核苷酸540个。扩增4代可产生16个DNA分子，根据DNA半保留复制原则，其中有一个DNA分子“相当”于亲代的DNA。所以，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸数为（16-1）*540=8100个。5、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方