蛋白质研究的基实本验方法

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1、蛋白质研究的基本实验方法南昌大学基础医学院生理教研室邹惟莹Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.实验研究三个水平整体水平：动物模型细胞水平：形态、功能分子水平：基因、蛋白质Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePty

2、Ltd.蛋白质的调控基因序列的变化：ErbB2染色质水平上基因活化的调节：染色质的结构（对核酸酶的敏感程度增加）组蛋白的甲基化（H3-K9基因沉默，H3-K4基因活化）组蛋白的乙酰化DNA的甲基化（5%C甲基化m5C；5’端CpG）Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.蛋白质的调控转录水平的调控顺式作用元件，反式作用因子（转录因子）转录后的调控翻译水平的调控翻译后

3、调控磷酸化、糖基化、泛素化定位Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.蛋白质调控的研究Qualitativemodel(cyclins)Quantitativemodel(CDK)Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011Aspose

4、PtyLtd.蛋白质研究的基本方法免疫印迹（WesternBlot）免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）染色质免疫共沉淀（ChIP）Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.WesternBlot免疫印迹（蛋白质印迹）是一种借助特异性抗体鉴定抗原的有效方法。是在凝胶电泳（高分辨率）和固相免疫测定技术（高特异性，高灵敏性）基础上发展而来。Evalu

5、ationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.WesternBlotEvaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.WesternBlotA.SamplepreparationB.ElectrophoresisC.Transfer

6、ofproteinsandstaining(Westernblotting)Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.蛋白裂解液的制备组织样品：取适量（约100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。细胞样品：每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS，加0.

7、1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.蛋白裂解液的制备Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.蛋白裂解液的制备RIP

8、ABuffer：裂解液和细胞应充分接触，RIPAbuffer足量。RIPA裂解液中蛋白样品含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法但可用BCA法测定蛋白浓度。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5