第12章高效液相色谱

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1、高效液相色谱第一节概述优缺经典LC适用范围广效率低GC高效、高速，高灵敏度、自动化300多万化合物中仅20%能用GCHPLC：由经典液相色谱→HPLC有三个突破1、高效填料：5μm10μm高效（经典LC75-590μm）2、高压泵输液：高压3、高灵敏度的检测器：仪器化HPLC特点：1、适用范围广2、高效3、高速4、高灵敏度（主要用UV5×10-10g/ml）5、流动相选择范围宽6、柱可以反复使用（可用1-2年）7、流动组分易收集8、安全第二节基本原理一、范氏方程：1、柱内展宽：H=A+B/μ+Cμ(A涡流扩B纵向扩C传质阻)在前述气相GC中B=2rDm中Dm比HPLC中大

2、105倍（D组分在流动相中扩数系数，r与填充物有关的因素）∴在HPLC中第二项可忽略故高效液相色谱的范氏方程为：H=A+CUcu-物质阴抗项A-涡流扩散H=A+CU（要记：下边解释一般了解即可）①涡流扩散项：A=2λdp（λ-不规则因子dp填充物直径）②传质阻抗项引起板高：C=Cm+Csm+Cs由于目前大都使用数学键合相，以Cs可忽略。，a、引起部分：Hs=—忽略11Cs—常数与颗粒内空隙体积分数及容量因子有关。dp填料直径Ds—组分在固定相中扩散系数。固定相的粒度dp对物质抗项也有影响b、由流动相引起部分：Hm=,Hsm=,（Hsm—静态流动相物质阻抗项）Cm—流动相的物

3、质阻抗系数，与填充物质结构有关∴HPLC的范氏方程：H=A+cu=2λdp+（）uCsCsm 由此方程：1/dp↓，H↓，n↑2/Dm↑，流动相粘度减小，H↓，n↑3/要使λ↓，H↓填充要均匀。1、柱外展宽：进样器联结管边等死体积越小越好。HPLCφ2-6mm10-30cm死全积约1ml记：由H=A+cu，在HPLC中可近似认为板高与速成正比（直线关系）μ↑，H↑，n↓，为了兼顾柱效和分析速度，一般采用较低流速，多用1ml/min流量。二、分离度及影响因素：又可：讨论如何由n、α、k来改变R1、K↑，↑，R↑，k最适宜范围1

4、组分两相中的量，以在吸附色谱or正相色谱，要k↑，流动相极性↓改变k11∵没讲正，反色谱（红色中）k↓，流动相极性↑而在反相色谱中恰好相反：k↑，流动相极性↑，k↓，流动相极性↓。2、改变α—变峰向征α↑，↑R↑在GC主要通过改变固定相（∵载量一定），而在HPLC中，主要通过改变流动相。3、改变n、n↑a、减小题粒直径dp↓C=b、提高装柱技术（均匀）c、流动相η↓（∵低粘度流动相可以增大Dm）（Dm组分在流动相速扩散）d、线速度u↓（减小传质阻抗引起H）e、增加柱长L（但太长，柱压大，寿命短）第三节各类HPLC法近年来新的HPLC法应运而生HPLC高效液相LSC液固LLC

5、液液IEC离子交换SEC空间排阻AC亲和色谱CE毛细管电泳BPC化学键合相NPBC正—RBPC反—PIC离子对ISC离子抑制我们仅讲其中部分内容：一、液-固吸附色谱：LSC111、机理：同前章，即组分分子与流动相分子争夺吸附剂表面的活性中心的能力不同而分离。通过Ka不同来达到目的的。在吸附色谱中，常用容量因子k=tR’/tm来讨论问题。2、影响k的因素：当柱与柱温（一般是室温）选定时，k与溶质与溶剂的性质有关。以硅胶吸附剂为例。①与硅胶亲和力大的溶质k大，tR大②控制溶剂的极性，可调整tR(常用多元体系流动相)溶剂的极性愈大，洗脱力愈强，k↓.tR↓)一、液-液分配色谱：L

6、LC分离机理同前几章：LLC与液相色谱同样有正相色谱与反相色谱之分。（一）正、反色谱正相反相固定相极性大小流动相极性小大流动顺序极性小的组分先流出极性大的组分先流出流动相极性↑，k↓，tR↓k↑，tR↑∵反相主要用于分离非极性及中等极性的各类分子型化合物。正相色谱常用固定相如：氰基与氨基化学键合相流动相：与以硅胶为固定相的吸附色谱选法一致。反相色谱常用非极性固定相如：十八烷基键合相（ODS；orC18表示）流动相：甲醇-水or乙腈-水pH2-8（继令相稳定，不变质）反相色谱是应用最广的色谱法，主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型化合物。（二）反相离子对色谱：（RPIC）

7、把离子对试剂加入极性流动相中，被分析的离子在流动相中与离子对试剂（反离子）生成不带电荷的中性离子时，从而增加在非极性固定相中的溶解度，使分配系数增大，而改变分离效果。由上分离原理可以看出，反离子对色谱并不难实现，只是在前边所讲的反相色谱的流动相中，加进离子对试剂，调节适当的pH即可进行实验。111、常用离子对试剂：分析样品离子对试剂例碱烷基磺酸钠正C5、C6、C7、C8磺酸钠酸四丁基季铵盐四丁基胺磷酸盐（TBA）2、机理：P316流动相固定相B+H+===BH++RSO3Na===RSO-3+Na+

8、

9、[BH+RS