石药实习论文

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1、河北化工医药职业技术学院毕业论文青霉素酰化酶制6-APA学生姓名栾晓敏班级煤化30801专业名称应用化工（煤化工方向）系部名称化学与环境工程系扌旨导教师胡亚伟提交日期2011年1月4日化学与环境工程系摘要6氨基青霉烷酸(6-APA)是重要的抗生素药物屮间体Z-,目前均采用青霉素酰化酶酶促裂解青霉素获得。木文介绍近年來青霉素酰化酶催化青霉素水解的研究进展，青霉索酰化酶的性质及其催化机理，青霉索酰化酶的固定化方法，青霉索酰化酶反应器的设计，反应介质工程的研究进展。青霉素酰化酶(penic订linacylase,penicillinamidase,penicillin

2、,amidohydralse,EC3.5.1.11)可以裂解青霉素获得重要的医药原料6氨基青霉烷(6-APA)。在口然界中来源广泛，细菌、放线菌、酵母和高等真菌都可以产生青霉素酰化酶。尽管冇报道推测青霉索酰化酶是在代谢芳香族化合物作为碳源的过程中具冇一定的作用，但产生的机理仍未明确。随着工业化进程的发展，环境污染的加重，生物催化绿色浪潮随之兴起，青霉素酰化酶的应用越来越广泛，围绕着青霉素酰化酶酶促裂解青霉素制备6-APA的研究也备受关注，作为一种重耍的工业酶，青霉素酰化酶在制备6-APA屮的应用已经有近三十年的历史了。木文对这一方向近年来的发展做一综述。目录第一

3、章酶的性质及其催化机理1第二章青霉素酰化酶的固定化3第三章青霉素酰化酶催化生产6-APA第一节两相系统中裂解青霉素的研究5第二节离子液体系统中裂解青霉素的研究7第三节反应器及其他技术7第四章结语参考文献10致谢11第一章酶的性质及其催化机理根据青霉素酰化酶在催化水解反应时所偏爱的底物不同，可将青霉素酰化酶分为3类:青霉素G酰化酶、青霉素V酰化酶和氨节西林酰化酶。近年来的研究发现，口然界仍然存在其它种类的青霉索酰化酶，如从放线菌中分离到的青霉索酰化酶口J以水解一些天然脂肪族的青霉素，因此可以定义为青霉素K酰化卿。青霉索酰化酶催化水解的底物结构非常相近，但是青霉素酰

4、化酶的结构上差别较大。来源于大肠埃希菌(Escherichiacoli)的青霉素G酰化酶具冇一个20.3ku的a亚基和一个68.4ku的B亚基。来源于球形芽孑包杆菌(Bac订lussphaericus)的青霉素V酰化酶是四个34.7ku亚基组成的四聚体。这两类酶都是N末端亲核水解酶的人家族成员，N末端亲核水解酶的共同点是在N末端具有催化残基。虽然青霉素V酰化卿的亲核残基是丝氨酸，青霉索G酰化酶的亲核残基是半胱氨酸，但是它们的折叠却是惊人的相似，都具有一个四层的催化活a33a核心结构。通过对来源于大肠埃希菌的青霉素G酰化酶的研究发现，它具有唯一活性中心，两个亚基紧

5、密交织在一起，组装成肾脏形，中间右一•凹槽，杂二聚体的大小表示为7nmX5nmX5.5nmo两者之间没有明显的分离区域，亚基之间接触角痕大，20%为疏水氨基酸，酶与苯乙酸、苯甲基磺酰氟化物(PMSF)的结合部位位于底物侧链的结合部位。这些抑制剂的苯基部位直接伸到酶分子疏水袋。Meta142,Phea146,PheB57,TrpB154,Ilel3177位于疏水袋两侧，SerB67封住疏水袋的底部袋口,[±SerP1和AsnP241的侧链和B23,B69的主链氮原子组成。McVey等采用多底物竞争性抑制，用X晶体衍射测定了底物苯乙酸、3,4二轻基苯乙酸、2,5二羟

6、基苯乙酸、p硝基苯乙酸等与青霉素酰化酶形成的复合物的三维结构，这些复合物结构揭示了底物结合区域构象的变化可能作为酶自催化的开关。结果发现Arga263参与了与底物的结合并协助AsnB241的定位，Phe146是底物进入活性中心的开关，酶活性高度依赖于AsnB241,在催化中心部位，B241Asn会导致形成氧阳离子的洞，而且对底物与SerB1也起到定位的作用，所以准确地说，青霉素酰化酶的催化活性屮心是SerAsn二联体。青霉素酰化酶的水解青霉素G的机制是1995年由Duggleby等阐明，青霉素酰化酶主要由其B亚基N末端丝氨酸残基发挥水解酰基作用。酶促水解反应是通

7、过酶活性屮心和底物分子形成一个四面体中间物进行的，四面体中磺酸基团与半缩醛非常相似。且这一四面体形成和解体是一个可逆的过程，拨基的质子化使得其碳原子更容易受到亲核进攻。B-1丝氨酸残基的0Y处于利于进攻拨基碳原子的位置。丝氨酸的0Y亲核进攻青霉索G的酰胺键按基碳原子后形成一个氧负离子四面体中间物，通过B23和B69的主要酰胺基团及P241Asn侧链的相互作用从而保持稳定，当释放6APA时，这个四面体中间物就发主解体。接着酰化酶受到水分子的进攻而产生另一个四而体屮间物，同样通过B23和B69的主要酰胺基团与P241Asn侧链的N6相互作用而稳定，当苯乙酸被释放时，

8、同时这个四面体结构发生解