重组人干扰素αdb质量肽图分析及二硫键定位

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1、维普资讯http://www.cqvip.com药物分析杂志ChinJPharmAnal2007，27(10)一1505一★论著★重组人干扰素b质量肽图分析及二硫键定位饶春明，陶磊，史新昌，杨英，韩春梅，裴德宁，王军志(中国药品生物制品检定所生化室，北京100050)摘要目的：液质联用绘制重组人干扰素otlb的质量肽图并鉴定二硫键位点。方法：LC—MS联用绘制重组人干扰素odb的胰蛋白酶酶切质量肽图；对比特定肽段的实测相对分子质量与理论相对分子质量初步定位二硫键，对比烷基化及还原烷基化处理后特定肽段实测相对分子质量的变化确证二硫键位点。结果：重组人干扰素o

2、tlb的质谱测定相对分子质量为19382．50，与理论相对分子质量19382．18一致，其质量肽图中共发现16个匹配肽段，有3个理论酶切片段(单一氨基酸：Lys135、Lys165、Glu166)未发现，氨基酸覆盖率为98．2％。通过分析胰蛋白酶酶切质量肽图，发现主要存在2种二硫键连接方式：Cys29一Cys139、Cys86一Cys99，同时还存在少量其他二硫键连接方式，如：C1一C99。结论：质量肽图可作为一种对重组蛋白制品进行质量控制的手段，并可定位蛋白中的二硫键。关键词：液质联用；质量肽图；还原烷基化中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：02

3、54—1793(2007)10—1505—06PeptitdemassmaLppPilnganalysisofrhIFN_IN—一毗bandlocalizationofdisulfidebondsRAOChun—ming，TAOLei，SHIXin—chang，YANGYing，HANChun—mei，PEIDe—ning，WANGJun—zhi(DepartmentofBiochemistry，NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiolog；calP／-oduets，Beijing10005

4、0，China)AbstractObjective：Tomeasurepeptidemassmapping(PMM)ofrhIFN—otlbbyLC—MSandidentifythesitesofdisulfidebonds．Methods：ThePMMofrhIFN—otlbdigestedbytrypsinwasmeasuredbyLC—MS：thesitesofdisulfidebondswereidentifiedroughlybycontrastingmeasuredrelativemolecularmasswiththeoreticalvalu

5、eofspecificpeptides，anditwasconfirmedbyspecificrelativemolecularmassvariationsbetweenpeptidesalkylatedandhydrogenizedbeforealkylated．Results：ThemeasuredrelativemolecularmassofrhIFN—Mbwas19382．50andthetheoreticalvalueis19382．18．16Matchedpeptidesweref0undinthePMMofrhIFN—otlbdigested

6、bytrypsin．and3theoreticallydigestedpeptides(singleaminoacides：Lys135，Lys165，Glu166)werenotfound，thefractionofcoveragewas98．2％．ThePMMofrhIFN—otlbdigestedbytrypsinshowedthatthemajortypesofdisulfidebondsexistinginproteinwereCys29一Cys139andCys86一Cys99．Othertypesinsmallamountsalsoexist

7、edsuchasC1一C99．Conclusion：PMMcanbeamethodforthequalitycontrolofrecombinationprotein，anditcanlo—calizethesitesofdisulfidebonds．Keywords：LC—MS；peptidemassmapping(PMM)；hydrogenizationandalkylation重组蛋白的生产是一个非常复杂的过程，从基新的抗原表位，产生不可预知的副作用。为了保证因重组、表达载体的构建、蛋白的分离、纯化、复性直蛋白制品的安全性，对蛋白制品的结构进行有效的

8、到分装保存，最后得到的蛋白制品的氨基酸序列与质量控制是必须的。理论