SC_T72191-2015三代虫病诊断规程第1部分：大西洋鲑三代虫病

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1、ICS65.020.30B50中华人民共和国水产行业标准SC/T7219.1-2015三代虫病诊断规程第1部分：大西洋链三代虫病ProtocolsfordiagnosisofGyrodactylosis—Part1:InfectionwithGyrodactylussalaris2015-05-01实施2015-02-09发布中华人民共和国农业部发布SC/T7219《三代虫病诊断规程》为系列标准：一一第1部分:大西洋鮭三代虫病；一一第2部分:銃三代虫病；一一第3部分:缱三代虫病；一一第4部分:中型三代虫病；——第5部分:细锚三代虫病；一一第6部

2、分:小林三代虫病；本部分为SC/T7219的第1部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。•请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些霜利的贯•任。本部分由农业部渔业渔政管理局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。本部分起草单位:中国科学院水生生物硏究所、全国水产技术推广总站。本部分主要起草人:李文祥、王桂堂、邹红、吴山功、陈爱平。三代虫病诊断规程第1部分：大西洋鮭三代虫病1范围本部分规定了大西洋鮭三代虫病的感染对象与临床症状，大西洋鮭三代虫的采集与固定、形态学鉴定和分子检测的方

3、法以及大西洋鮭三代虫病的综合判定。本部分适用于鮭、鱒鱼类大西洋鮭三代虫病的流行病学调查、诊断、监测和检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范3试剂和材料3.1水：符合GB/T6682中一级水的规定。3.2乙醇:分析纯。3.3Taq酶:一2CTC保存，避免反复冻融。3.4dNTPs：含dATP、dTTP、dGTP和dCTP各

4、10mmol/L。3.5上游引物:5TTTCCGTAGGTGAACCT・3’。3.6下游弓

5、物:5TCCTCCGCTTAGTGATA・3、3.7矿物油：不含DNA酶和RNA酶。3.8DNAmarker2000:2000bp、I000bp、750bp、500bp、250bp、100bp。3.9其他试剂见附录A。4仪器和设备4.1解剖盘、剪刀、错子、解剖针和手术刀。4.2体视显微镜和带测微标尺的光学显微镜。4.3盖玻片、载玻片和培养皿。4.4电子天平。4.5普遹台式离心机和高速冷冻离心机。4.6普通冰箱和超低温冰箱。4.7微量移液器。4.8PCR扩

6、增仪。4.9离心管和PCR管。4.10紫外透射仪。4.11水平电泳系统。5感染对象与临床症状5.1感染对象大西洋鮭三代虫能感染野生和养殖大西洋鮭(Sa/moMZar)、褐鱒(SaZwofrMtta)，还有虹鱒(()《・corhychusmykiss)、才顷红点、軽XSalvelimisalpinus)、］窮点、酱(&fontinalis)、点、餘,S~namay-)和菌鱼(TTijwia)李。5.2临床症状大西洋鮭三代虫主要寄牛.于体表，病龟常出现蹭擦池夔、跃出水面的行为;有些病龟反应迟钝，常在水流缓慢的地方出现，体表因黏液增多变成淡灰色，背鳍

7、、尾鳍和胸鳍的边缘出现糜烂。6三代虫采集与固定6・1病鱼采集仔细观察待检鱼类的临床症状和行为，捞取具有典型症状的鱼类，采样方法、样品数量、样品封存和运输应符合SC/T7103的规定。6.2三代虫样品的采集6.2.1现场采集剪取鳍条或刮取部分体表黏液，置于载玻片上，滴加数滴清水，置于体视显微镜下观察。用解剖针将三代虫从鳍条或体表黏液中分离，用吸管吸出，放在盛有清水的培养皿中，每尾病铠至少采集成虫10条。6.2.2固定病鱼中的采集剪取病鱼鲂条放在载玻片上，逐滴加人自来水浸泡10min,8于体视显微镜下观察。发现三代虫后:用解剖针将虫体分离，放在盛有

8、清水的培养中。同时，镜检固定病色所用容器底部的沉淀物。如发现有从鱼体脫落的三代虫，用吸管吸出，放在盛有清水的培养im中。6.3三代虫样品的固定与保存加一滴清水到载玻片上，用吸管吸取一个虫体置于水滴中，轻轻地盖上盖玻片。用一张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水，百到水基本吸T为止。加上一滴APG溶液(见附录A.1)到盖玻片边缘，頁到浸满盖玻片匀载玻片之间的空隙。用于形态学鉴定的虫体样本可用70%酒精保存，用于PCR鉴定的虫体样品可用95%酒精保存。7大西洋鮭三代虫的鉴定7.1大西洋鮭三代虫的形态学鉴定大西洋鮭三代虫运动如尺蜒:虫体呈長叶形，体长o・5mm〜

9、1・0mm,体前有2个头器，无黑色眼点;虫体后端具几丁质的伞状后吸器，其上有1刘锚钩、16个边缘小钩和1根腹联结片;腹联结片上端中部凹陷明显，突起间长