USP29-61微生物限度检查中文

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1、USP29-61微生物限度检查中文USP29-<61>微生物限度检杳<61>微生物限度检杳本章所提供的检测程序用于测定包括原料药及制剂在内的各种药品中需氧菌数量以及不含有指定的微生物。如果己有充分的证据证明某种自动化的方法对以给出与本章所提供的方法等效的或更好的实验结果，町以用该方法替代本章所提供的方法。在实验准备以及实施的过程中，应遵守无菌操作。除另有规定外，木检杳法屮“孵育”是指将容器置于温度控制在30-35T的空气中24-48小时。术语“生长”在此处是专用于表示存活的微生物的增殖。预试验（验证试验）应有充分的证据证明在实验条件下检品本身对可能存在微生物的增殖无抑制作川，这在

2、很人程度上决定了下述所规定的检查方法的结果有效性。因此，应进行预试验，测定金黄色衙萄球菌、人肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及沙门氏菌分别接种到稀释的检品屮共同培养后的存活情况，以使检查标准化并作为随后试验的具体要求。方法如下：接种lml金黄色葡萄球菌、人肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及沙门氏菌的24小时肉汤培养物（稀释度人于等于10-3）至最低稀释级样品供试液中（样品用pll7.2磷酸盐缓冲液，大豆-酪蛋白水解物琼脂培养基或乳糖液体培养基稀释），若微生物在相应的培养基中不能工长，则该部分试验无效，有必要按下述步骤对实验进行调整：通过（1）,增加稀释剂的体积，供试品量保持不变，或（2）在稀释剂

3、中加入足够量的灭活剂；或（3）适当地将（1）和（2）结合使接种物町以生长。可在培养基中加入0.5%的大豆卵磷脂和4.0%的聚山梨酸酯-20以中和供试品中的所存在的抑菌成分。或者用酪蛋白水解物-大豆卵磷脂-聚山梨酸酯-20-培养基按前述方法重复试验以确认对供试品屮的保护剂或其他抗菌剂的屮和作用。若产品屮含有抑菌成分，而该产品又是对溶的，对采用无菌检查项下产品的无菌检査法中的薄膜过滤法。如果在加入灭活剂或大大增加稀释剂的体积后仍不能使上述培养物恢复存活，而且该产品不适合采川薄膜过滤法，可以作如下推断：所接种微生物的分离培养失败是由于该产品的抑菌活性。此信息表明该产品未被指定（上述给定

4、）的微生物所污染（此信息表明该产品大概不会被上述给定的微久物所污染）。应继续进行监测以建立该产品的抑菌谱和杀菌活性范围。缓冲液和培养基培养基既可以按以下处方配制，也可以使用生产者或销售商推荐的，与该配方和类似USP29-<61>微生物限度检查14-2的脱水培养基。按以下程序配制培养基：将对溶性同体溶解在水中，必要时对加热促使其完金溶解，fflHC1或NaOII溶液调节培养基的pH使其在使用时达到规定值。在25土2°C吋测定pH值。如果配方屮有琼脂，则琼脂的含水量不应超过15%,配方屮的水均应为纯水。PII7.2磷酸盐缓冲液储备液一在1000ml容量瓶中将磷酸二氢钾KlI2P043

5、4g（monobasicpotassiumphosphate）溶于约500ml水中,NaOHTS（约175ml）调节pH至7.2±0.l0加水至刻度，混匀。分装，灭菌。冷藏保存备用。培养基除非另有规定，培养基均应采用高压蒸汽灭菌方式（见灭菌项＜1211＞下，蒸汽灭菌），灭菌时间取决于待灭菌的培养基的体积。PancreaticDigestofCasein酪蛋白胰酶消化物（胰酪腺）20gSoyLecithin大豆卵磷脂5g1Polysorbate20聚山梨醇酯2040mLWater960mL将酪蛋门丿冻、人豆卵磷脂溶解在960ml水屮，在温度为48-50°C水浴屮加热约30分钟使其完

6、全溶解。加40ml聚山梨醇酯20混合，按所需量分装。II.大豆-酪蛋门水解物琼脂培养基PancreaticDigestofCasein酪蛋白胰酚水解物（胰酩腺）PapaicDigestofSoybeanMeal大豆木瓜酶水解物SodiumChlorideNaCIAgar琼脂Water水灭菌后pH7.3±0.20TTI.人豆-酪蛋白水解物培养基按无菌检杳项〈71＞下人豆-酪蛋门水解物培养基的配制方法进行。IV.甘露醇-盐琼脂培养基广PancreaticDigestofCasein酪蛋白胰酶消化物（胰酪,11PepticDigestofAnimalTissue动物组织冒荊水解物Bee

7、fExtract牛肉浸取物D-MannitolD-甘露醇SodiumChlorideNaCI1Agar琼脂PhenolReel酚红Water水PancreaticDigestofCasein酪蛋白胰酶消化物（胰酪腺）10.0g1BeefExtract牛肉浸取物5.0g1YeastExtract酵母浸取物l.Og1LithiumChloride氯化锂5.0QAgar琼脂20.0gGlycine甘氨酸12.0grSodiumPyruvate丙酮酸钠10.0gWater水950mL将上