基于茎环引物定量检测miRNA的研究进展_宋伟

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1、基于茎环引物定量检测miＲNA的研究进展*宋伟，万百惠，王静，董平，梁兴国(中国海洋大学食品科学与工程学院，山东青岛266003)摘要:MicroＲNAs(miＲNAs)是一类长约22nt的内源ＲNA，通过抑制和破坏ＲNA的方式对动植物体内的基因表达起重要调节作用，其相关方面的研究已成为热点。针对miＲNA巧妙设计茎环引物(Stem－loopPrimer)，经过反转录、PCＲ扩增两个步骤，可使实时荧光定量PCＲ技术(ＲT－qＲCＲ)用于miＲNA的定量检测，简称SLP－ＲT－qPCＲ技术。这种茎环引物定量检测技术有特异性强

2、、灵敏度高、可检测范围广和定量准确等特点。另外，最近开发的多重定量法可以同时对样品中多种miＲNA进行定量。以上诸多优势，使之对miＲNA的研究起到了有力的推动作用。本文系统介绍了该技术自建立近十年来在引物设计、多重定量、荧光标记等方面的发展及其应用情况，对其原理及关键技术进行综述，以期对miＲNA的定量检测的应用和发展有所帮助。关键词:microＲNA，ＲT－qPCＲ，茎环引物，测定ＲesearchadvanceofmiＲNAquantificationbyＲT－qPCＲbasedonstem－loopprimer*SO

3、NGWei，WANBai－hui，WANGJing，DONGPing，LIANGXing－guo(CollegeofFoodScienceandEngineering，OceanUniversityofChina，Qingdao266003，China)Abstract:MicroＲNAs(miＲNAs)areatypeofendogenousＲNAs(～22nt)whichplayanimportantrolesingeneexpressionandregulationofanimalsandplantscellsbyd

4、estroyingorsuppressingtargetingＲNAs.Thus，theresearchesrelatedtomiＲNAhaveattractedmoreandmoreattentions.ToquantifyacertainmiＲNA，ＲealTime－quantitativePCＲ(ＲT－qＲCＲ)couldbeadoptedincludingreversetranscriptionandPCＲamplificationusingastem－loopprimerdesignedaccordingtoth

5、etargetmiＲNA.ThismethodiscalledSLP－ＲT－qPCＲforshort.ThemiＲNAquantificationmethodusingSLP－ＲT－qPCＲhasalotofadvantages，includinghighspecificity，highsensitivity，widedetectionrange，precisequantification，etc.Moreover，multiplexingＲT－PCＲdevelopedinrecentyearsmadeitpossible

6、todetermineseveralkindsofmiＲNAssimultaneously.AlltheadvantagesmentionedabovegreatlypromotedthestudyofmiＲNA.Inthispaper，thedevelopmentandapplicationofprimerdesign，multi－quantificationandfluorescencelabelingfromtheestablishmentofthemethodabouttenyearsagowasintroduce

7、d.Thetheoryandkeytechnologiesofthismethodwasalsoreviewed.ThereviewwillbehelpfultotheapplicationanddevelopmentofmiＲNAquantification.Keywords:microＲNA;ＲT－qPCＲ;stem－loopprimer;determination中图分类号:TS201.1文献标识码:A文章编号:1002－0306(2014)19－0378－06doi:10．13386/j．issn1002－0306

8、．2014．19．074［5－7］［8］miＲNA是一类广泛存在于生物体内的非编码作用。近期Zhang等人以小鼠作为研究对象，［1］ＲNA，长度约为22nt。自1993年Lee等人首先发对经口服摄入的植物miＲNA的功能进行研究，惊喜现lin－4基因表达的一种小ＲNA(lin－4ＲNA)以来，的发现大米