各种类型细胞器探针

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1、各种类型的细胞器探针线粒体线粒体是细胞的能量工厂。因其参与了细胞凋亡，这些年也成为研究的热门。线粒体的荧光探针主要有：JC-1、Rhodamine123等，Invitrogen还推出专门的MitoTracker系列探针。JC-1是用得最多的。它在浓度或线粒体膜电位低时，以单体存在，激发波长为490nm，发射波长为527nm，呈绿色荧光。当浓度升高或线粒体膜电位升高时，JC-1形成J-聚体，呈橙色荧光，此时激发波长为490nm，发射波长为590nm。JC-1最重要的应用是检测活细胞内线粒体的膜电位，以及追踪凋亡细胞中的线粒体变化。Rhod

2、amine123是一种能渗透入细胞，带阳离子的荧光探针。它的激发波长为505nm，发射波长为534nm。活细胞摄取Rhodamine123达到平衡的速度较快，只需5分钟，通过激光扫描共聚焦显微镜观察，即可见到线粒体被Rhodamine123染成绿色。当细胞被反复冲洗时，Rhodamine123通常不被细胞保留，但许多癌细胞可较长时间保留这种染料，因此，它有助于某些癌症的诊断。MitoTracker系列探针则是Invitrogen专为线粒体而设计的。MitoTracker是细胞通透性的，只要与细胞简单孵育，就能被动渗透质膜，在有活性的线粒

3、体中积累。一旦线粒体被标记，细胞就能用甲醛固定剂固定，一些MitoTracker探针能在固定之后保留在线粒体内。这对致病细胞格外有用。而一些探针在随后的去污剂处理后还能保留，这样就能用在免疫细胞化学或原位杂交中。尽管传统的线粒体探针如Rhodamine123也很容易标记线粒体，但是一旦线粒体的膜电位损失，它们就很容易被洗掉。这就限制了某些应用。MitoTracker探针又分为好几种，且有红色、绿色和橙色。其中还原态的MitoTrackerOrangeCM-H2TMRos和MitoTrackerRedCM-H2Xros在进入细胞后不发出荧

4、光，直到它们被氧化成相应的线粒体选择性探针，并聚集在线粒体内。红色的MitoTracker探针都适合于多色标记实验，因为它们的红色荧光能与其他绿色荧光很好地区分开。尽管有些MitoTracker探针能实现固定细胞中的线粒体标记，但这些染料还是只推荐给活细胞。如果你想要标记固定细胞，可以选择OxPhos的抗体+荧光二抗。内质网内质网的功能有哪些？你还记得吗？复习一下，内质网是细胞中由膜围成的分支小管、小囊或扁平囊状结构连通而成的管道系统，可分为粗面内质网和滑面内质网两种。粗面内质网上附着有核糖体，是合成蛋白质的主要场所；滑面内质网则功能多

5、样，比如在肝细胞中与解毒和糖代谢有关。常用的DiOC6(3)及相似的DiOC5(3)都属于短链羰花菁染料，它们广泛用于内质网的研究，包括神经元、酵母中内质网的结构作用和动力学，以及不同细胞类型中内质网、线粒体和微管的形态关系。它们不仅可标记活细胞中的内质网，也可以用于甲醛固定的细胞。DiOC6(3)进人细胞内与内质网结合，在激光激发下发出绿色荧光，根据内质网的形态学特征很容易识别。需要注意的是，在相对低浓度时，DiOC6(3)聚集在线粒体中，而在高浓度时，则可聚集于其他膜性细胞器，包括内质网膜。长链的羰花菁染料DiIC16(3)和DiI

6、C18(3)也可以标记内质网膜。DiIC16(3)的激发波长为550nm，发射波长为564nm；DiIC18(3)的激发波长为550nm，发射波长为565nm，均呈黄色荧光。DiIC16(3)和DiIC18(3)的分子结构与DiOC6(3)大致相同。DiIC16(3)有两个更长的碳链，使Dil不能透过膜。一旦DiI结合到膜内，它就保留膜中，在膜的两层内自由扩散。DII已经用来标记神经元细胞和肌细胞的内质网。ER-Tracker染料是Invitrogen开发的细胞通透性的活细胞染料，是ER高度选择性的。它们与常规的ER染料DiOC6(3)

7、不同，很少会对线粒体染色，且低浓度下的染色不会对细胞带来毒性。ER-TrackerBlue-WhiteDPX属于Dapoxyl染料家族中的一员，因此有着相当大的斯托克斯位移，长发射波长，以及高的消光系数和量子产率。它的荧光对环境极其敏感，当溶剂极性增加，荧光发射峰会移向更长的波长-从430nm到640nm，量子产率下降。Invitrogen推荐用标准的DAPI或UVlongpass滤光片来观察它的内质网染色。ER-TrackerGreen和ER-TrackerRed的激发/发射峰分别为504/511nm和587/615nm。真菌代谢物b

8、refeldinA(BFA)是解析多个胞内进程的重要工具，包括参与运输新合成蛋白的囊泡形成及驱动蛋白分布。将细胞暴露在BFA中，会引起细胞内从内质网到高尔基体的蛋白转运的失常，最终导致高尔基体形态的丧失，而