罗田板栗玫瑰红栗实内生细菌的分离鉴定

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1、罗田板栗玫瑰红栗实内生细菌的分离鉴定罗田板栗玫瑰红栗实内生细菌的分离鉴定摘要：为了探明罗田板栗新品系玫瑰红耐贮藏的内在原因，评价其栗实中的内生细菌资源，用组织分离培养法从栗实中分离其内生细菌，并通过比对结构、生理生化特征及16SH)NA序列分析等方法对所分离的内生细菌进行鉴定。结果从玫瑰红板栗栗实中分离得到2株内生细菌FR1和FR2,经鉴定为水生拉恩菌(Rahnellaaquatilis)和地衣芽砲杆菌(Bacilluslicheniformis)o关键词：罗田板栗；玫瑰红；内生细菌；分离鉴定;16SrDNA中图分类号：S664.2；Q948.122.3文献标识码:A文章编

2、号:0439-8114(2014)04-0806-03IsolationandIdentificationoftheEndophyticBacteriafromCastaneamollissima'Meiguihong'ofLuotianCountyLILin-ling,HUAJuan,CHENGHua,LIAOZhi-qin,WANGYu-ping,YUANHong-hui,CHENGShui-yuan(EconomicForestGermplasmImprovementandComprehensiveUtilizationofResourcesofHubeiKeyLab

3、oratories,HuanggangNormalUniversity,Huanggang438000,Abstract：InordertoexplorethemechanismofCastaneamollissimaBlume・Hubei,China)varietyofchestnutfromLuotian,andstoragetolerance"Meiguihong',theresourcesanewofendophyticbacteriawereevaulatedfromitschestnut・Twokindsofpathogenicbacterium,FR1andF

4、R2,wereisolatedfromthedecayedseedsofChinesechestnut.ThesetwostrainswerepreliminarilyidentifiedasRahnellaaquatilisandBacilluslicheniformisbycomparingstructure,characteristicsofbiochemistryandphysiology,sequenceof16SrDNA・Keywords：chestnutofLuotian；Meiguihong；endophyticbacteria；isolationandid

5、entification；16SrDNA板栗(CastaneamollissimaBlume)俗称栗了，营养丰富，风味较佳，是重要的干果品种，中国板栗的栽培面积和总产量均居世界首位。板栗对山区经济发展和出口创汇具有重要意义。但由于其含水量高的特点，贮藏期易发生栗实腐烂，腐烂率甚至可高达50%,严重制约了板栗产业的发展［1］。栗实腐烂的发纶机理及绿色防治逐渐成为研究热点［2-5］o内生菌(Endophyte)是指在生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部，•冃•被感染的宿主植物(至少是暂时)不表现出外在病症的真菌或细菌［6］o这些内生菌对宿主植物的生长发育、抗

6、逆性、抗虫性及抗病性方面均有重要作用，在农业生产、化工制药、卫生保健等方面有巨大的潜力［6,7］。研究者已在棉花、玉米、甜菜、烟草和黄瓜等多种作物体内分离筛选到具有防病或诱导抗病的内生真菌和细菌［6-10］，但关于板栗栗实内生细菌资源的研究鲜见报道。试验以新培育的耐贮藏南方板栗一一罗田板栗新品系玫瑰红栗实为研究对象，采用组织分离法分离，并利用16SrDNA序列分析和形态、生理生化相结合的方法鉴定其内生细菌，以期为筛选抗栗实腐烂的拮抗细菌及开发生防保鲜剂奠定基础。1材料和方法1.1材料1.1.1板栗果实板栗品系为玫瑰红，采摘于湖北省罗田县胜利镇，去苞壳后得到栗实。1.1.2培

7、养基LB培养基：胰蛋白月东10g,酵母提取物5g,氯化钠10g,琼脂20g,水1000mL,pH7.2。1.1.3主要试剂克隆载体PMD18-T购自TAKARA公司;2XTaqmix、TaqDNA聚合酶、dNTP、DNAMarkerDL2000购口宝生物工程(大连)有限公司，大肠杆菌TOP10菌株为经济林木种质改良与资源综合利用湖北省重点实验室保存；细菌16SrDNA通用引物27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'、1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-37由上海生工生物工程