异型淋巴细胞检查操作规程

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1、1•原理把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用瑞氏染液染色，根据各类异型淋巴细胞形态特征予以分类计数，得出相对比植包分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。2.标本的采集及其注意事项2.1静脉采血2.1.1.方法：采用真空采血管含EE5M2（3.（W.（M,按抗凝剂与血液的比例从肘静脉采血，采血后轻轻颠倒混匀，室温保存，4小时内完成检测。2.1.2.注意事项2.1.2.L防止溶血，淤血，标本不能从输液管中或输液手的同侧静脉采集。2.1.2.2.抗凝管瓶）应贴有标签，并清楚注明病人姓名、病区、住

2、院号、Wo标本应与申请单一起及时送检，室温保存不得大于4小时。2.1.2.3当肘静脉不明显时，可采用手背部，手腕部，？窝部和外踝部静脉。幼儿可采用颈外静脉采血。2.2.毛细血管采血2.2.1.方法2.2.1.1•采血部位：成人左手中指或无名指尖内侧为宜，半岁以上儿童以中指为好，半岁以下婴幼儿通常自拇指或足在底部外侧缘采血。2.2.1.2.轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用759乙醇棉球消毒局部皮肤待干。2.2.1.3.紧捏刺血部位，用无菌采血针穿刺，取血动作应迅速，深度约2-^nn）以稍加挤压血液能流出为宜。2

3、.2.1.4.用干棉球擦去第一滴血，按实验需要依次采血。2.2.1.5.采血完毕，用干棉球压住伤口片刻。2.2.2.注意事项2.2.2.1.末梢采血要避开冻疮、发炎、水肿等部位，以避免影响结果。2.2.2.2.皮肤消毒一定要待乙醇挥发干燥后采血，否则流出的血液1四处扩散而不成滴。2.2.2.3.严格按照无菌技术操作，保证一人一针一管，杜绝交叉感染。2.试剂与仪器2.1•试剂:瑞氏染液2.1.1•瑞氏染液配制：瑞氏染料830卵或lg甲醇闵500ml或600ml先称干燥事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳

4、棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一淸洁储存瓶内最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨,重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。2.1.2.缓冲液：2.1.2.1.缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。缓冲液须保持一定的p

5、H使染色稳定，PBS的pH—般在6.0.8,偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。2.1.2.2.缓冲液配制（pH6.O.8,弱酸性）：KH2KM死水）.64gNa2HPD无水）.56glH2O斷鲜）至1000ml2.2.仪器:显微镜、松柏油3.操作3.1.采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。3.2.推好的血膜在空气屮晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应于37C温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。2.3.染色：采用瑞氏染色法染色平置玻

6、片于染色架上，滴加染液15滴，使其迅速盖满血朕，约lmin后，滴加缓冲液5-10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，于染液充分混合，5-10min后用水冲去染液，待干。2.4.选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出异淋所占比值百分率）。5异型淋巴细胞分型Downey将异型淋巴细胞分为三型：3.1.I型饱沫型或浆细胞型）细胞中等大小，细胞多呈现圆形或部分不规则形或阿米巴型，胞质嗜碱性强，呈深蓝色，含有大小不等的空泡或呈泡沫状,无颗粒或有少颗粒，胞核偏位，呈椭圆形

7、、肾形或分叶形，染色质粗糙，呈粗网状或成堆排列。3.2.II型不规则型或单核细胞样型）细胞胞体较1型大，形态不规则，胞质量多，呈浅灰蓝色，但靠胞膜边缘处较深染且不整齐，无空泡，可有少数天青胺蓝颗粒，胞核呈圆形、椭圆形或不规则形，染色质较I型细致，亦呈网状。5.3.m型幼稚型或幼淋巴细胞样型）细胞形态不规则，胞质呈蓝色，可有分布较均匀的小空泡，一般无颗粒，胞核圆形或卵圆形，可见核仁1〜2个，染色质细致、均匀，呈网状排列，无浓集现象。6临床意义异型淋巴细胞增高常作为传染性单核细胞增多症的诊断依据。异型淋巴细胞于疾病

8、第45天开始出现，第7天达高蜂，大多超过2C%一般异型淋巴细胞〉1巩卩具有诊断意义。