实验五蛋黄中卵磷脂的提取纯化与鉴定

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1、实验五：蛋黄中卵磷脂的提取、纯化与鉴定一、实验目的■掌握从鲜鸡蛋中提取卵磷脂的方法与原理。■卵磷脂鉴定的方法与原理。■加深了解磷脂类物质的结构和性质。二、实验内容磷脂是一类含有磷酸的脂类，机体屮主要含启两人类磷脂，由甘汕构成的磷脂称为甘汕磷脂（phosphoglyceride）；由神经艄氨醇构成的磷脂，称为鞘磷脂（sphingolipid）。其结构具冇由磷酸相连的取代基团（含氨碱或醇类）构成的亲水头（hydrophilichead）和由脂肪酸链构成的疏水尾（hydrophobictail）o在生物膜中磷

2、脂的亲水头位于膜表面，而疏水尾位于膜内侧。磷脂是重要的两亲物质，它们是牛•物膜的重要组分、乳化剂和表血活性剂。磷脂依照氨基醇的不同可分：（1）磷脂酰胆碱（卵磷脂）（PC）,分布：植物主要有大豆等，动物主要有脑、精液、肾上腺、红细胞，蛋卵黄（8・10%）。其主要作用是控制肝脂代谢，防止脂肪肝的形成；（2）、磷脂酰乙醇胺（脑磷脂）（PE）,参与血液凝结；（3）、磷脂酰丝氨酸（PS）：（4）、磷脂酰肌醇（PI）；（5）、磷脂酰甘汕（PG）：（6）、二磷脂酰甘油（心磷脂）。蛋黄磷脂属动物胚胎磷脂，含有大量的胆固

3、醇和片油三酯及许多人体不可缺少的营养物质和微量元素。卵磷脂是生命的慕础物质，人类生命自始至终都离不开它的滋养和保护。卵磷脂存在于每个细胞之屮，更多的是集屮在脑及神经系统、血液循环系统、免疫系统以及肝、心、肾等重要器官。卵磷脂也被誉为与蛋白质、维生素并列的“笫三营养素覽蛋黄卵磷脂可将胆固醇乳化为极细的颗粒，这种微细的乳化胆固醇颗粒可透过血管壁被组织利用，而不会使血浆中的胆固醇增加。三、实验原理、方法和手段原理一：卵磷脂是生物体组织细胞的垂要成分，匸要存在于大U筹植物组织以及动物的肝、脑、脾、心、卵等组织中

4、，尤其在蛋黄中含量较多（10%左右）。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙瞇而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质乂可将卵磷脂和脑磷脂分离。原理二：卵磷脂为口色，当与空气接触后，其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。甘油与硫酸氛钾共热，可牛成具有特殊臭味的丙烯醛；磷酸盐在酸性条件下与钳酸镀作用，生成黄色的磷钳酸沉淀；胆碱在碱的进一步作用下生成无色H.具冇氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通过对分解产物的检验可以对卵

5、磷脂进行鉴定。四、实验组织运行要求根据木实验的特点、要求和具体条件，采用“采用集中授课形式，分组试验进行"的组织运行模式。五、实验条件1、实验材料：鲜鸡蛋2、仪器与器皿：蛋清分离器、恒温水浴锅、蒸发皿（每组一个）、漏斗（每组一个）、铁架台、磁力搅拌器（每组一个）、天平、25mL量筒（每组一个）、lOOmL量筒（每组一个）、干燥试管（每组四支）、玻棒2支、小烧杯大小各2个。3、试剂：95%乙醇（每3150mL）＞乙瞇（每组20mL）、丙酮（每组30mL）、ZnCl2s无水乙醇（每组4OmL）.滤纸（2张）

6、、10%氢氧化钠（每组30mL）、3%漠的四氯化碳溶液（每组10mL）、红色石蕊试纸（每组二张）、3%漠的四氯化碳溶液（每组10mL）、硫酸氢钾（每组10mL）、钳酸鞍溶液（每组10mL,钳酸鞍试剂将6g钳酸鞍溶于15mL蒸憎水中，加入5mL浓氨水，另外将24mL浓硝酸溶于46mL的蒸谓水中，两者混合静置一•天后再用。）。六、实验步骤1）、卵磷脂的提取方法一、蛋黄10g放入洁净的带塞三角瓶中，加入95%乙酸40ml,搅拌15min后，静置15min；然后加入10ml的乙瞇,搅拌15min后，静置15mi

7、n；过滤;滤渣进行二次提取,加入乙醇与乙離（体积比为3：1）的混合液30ml,搅拌、静置一定时间;第二次过滤,合并二次滤液，加热浓缩至少量，加入一定量丙酮除杂，卵磷脂即沉淀出來，即得到卵磷脂粗品。方法二、称取10g蛋黄于小烧杯中，加入温热的95%乙醇30mL,边加边搅拌均匀，冷却后过滤。如滤液仍然混浊，可再次过滤至滤液透明。将滤液査于蒸发1111内，于水浴锅屮蒸干（或用加热套蒸干，温度可设140C左右），所得干物即为卵磷脂。（为了减少或尽可能不用乙瞇，实验采用方法二）2）、卵磷脂的纯化取一定量的卵磷脂粗

8、品，用无水乙醇溶解，得到约10%的乙醇粗提液，加入相当于卵磷脂质量的10%的ZnCb水溶液，宗温搅拌0.5h；分离沉淀物，加入适量冰丙酮（4°C）洗涤，搅拌lh,再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色1上，得到口色腊状的精卵磷脂；T燥；称重。3）、卵磷脂的溶解性试验卵磷脂的溶解性：取干燥试管，加入少许卵磷脂，再加入5mL乙醸，用玻棒搅动使卵磷脂溶解，逐滴加入内酮3〜5mL,观察实验现象。4）、卵磷脂的鉴定4.1三甲胺的检验取干燥试管一支，加