实验五蛋黄中卵磷脂的提取纯化与鉴定

实验五蛋黄中卵磷脂的提取纯化与鉴定

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1、实验五:蛋黄中卵磷脂的提取、纯化与鉴定一、实验目的■掌握从鲜鸡蛋中提取卵磷脂的方法与原理。■卵磷脂鉴定的方法与原理。■加深了解磷脂类物质的结构和性质。二、实验内容磷脂是一类含有磷酸的脂类,机体屮主要含启两人类磷脂,由甘汕构成的磷脂称为甘汕磷脂(phosphoglyceride);由神经艄氨醇构成的磷脂,称为鞘磷脂(sphingolipid)。其结构具冇由磷酸相连的取代基团(含氨碱或醇类)构成的亲水头(hydrophilichead)和由脂肪酸链构成的疏水尾(hydrophobictail)o在生物膜中磷

2、脂的亲水头位于膜表面,而疏水尾位于膜内侧。磷脂是重要的两亲物质,它们是牛•物膜的重要组分、乳化剂和表血活性剂。磷脂依照氨基醇的不同可分:(1)磷脂酰胆碱(卵磷脂)(PC),分布:植物主要有大豆等,动物主要有脑、精液、肾上腺、红细胞,蛋卵黄(8・10%)。其主要作用是控制肝脂代谢,防止脂肪肝的形成;(2)、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)(PE),参与血液凝结;(3)、磷脂酰丝氨酸(PS):(4)、磷脂酰肌醇(PI);(5)、磷脂酰甘汕(PG):(6)、二磷脂酰甘油(心磷脂)。蛋黄磷脂属动物胚胎磷脂,含有大量的胆固

3、醇和片油三酯及许多人体不可缺少的营养物质和微量元素。卵磷脂是生命的慕础物质,人类生命自始至终都离不开它的滋养和保护。卵磷脂存在于每个细胞之屮,更多的是集屮在脑及神经系统、血液循环系统、免疫系统以及肝、心、肾等重要器官。卵磷脂也被誉为与蛋白质、维生素并列的“笫三营养素覽蛋黄卵磷脂可将胆固醇乳化为极细的颗粒,这种微细的乳化胆固醇颗粒可透过血管壁被组织利用,而不会使血浆中的胆固醇增加。三、实验原理、方法和手段原理一:卵磷脂是生物体组织细胞的垂要成分,匸要存在于大U筹植物组织以及动物的肝、脑、脾、心、卵等组织中

4、,尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙瞇而不溶于丙酮,利用此性质可将其与中性脂肪分离开;卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶,利用此性质乂可将卵磷脂和脑磷脂分离。原理二:卵磷脂为口色,当与空气接触后,其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。甘油与硫酸氛钾共热,可牛成具有特殊臭味的丙烯醛;磷酸盐在酸性条件下与钳酸镀作用,生成黄色的磷钳酸沉淀;胆碱在碱的进一步作用下生成无色H.具冇氨和鱼腥气味的三甲胺。这样通过对分解产物的检验可以对卵

5、磷脂进行鉴定。四、实验组织运行要求根据木实验的特点、要求和具体条件,采用“采用集中授课形式,分组试验进行"的组织运行模式。五、实验条件1、实验材料:鲜鸡蛋2、仪器与器皿:蛋清分离器、恒温水浴锅、蒸发皿(每组一个)、漏斗(每组一个)、铁架台、磁力搅拌器(每组一个)、天平、25mL量筒(每组一个)、lOOmL量筒(每组一个)、干燥试管(每组四支)、玻棒2支、小烧杯大小各2个。3、试剂:95%乙醇(每3150mL)>乙瞇(每组20mL)、丙酮(每组30mL)、ZnCl2s无水乙醇(每组4OmL).滤纸(2张)

6、、10%氢氧化钠(每组30mL)、3%漠的四氯化碳溶液(每组10mL)、红色石蕊试纸(每组二张)、3%漠的四氯化碳溶液(每组10mL)、硫酸氢钾(每组10mL)、钳酸鞍溶液(每组10mL,钳酸鞍试剂将6g钳酸鞍溶于15mL蒸憎水中,加入5mL浓氨水,另外将24mL浓硝酸溶于46mL的蒸谓水中,两者混合静置一•天后再用。)。六、实验步骤1)、卵磷脂的提取方法一、蛋黄10g放入洁净的带塞三角瓶中,加入95%乙酸40ml,搅拌15min后,静置15min;然后加入10ml的乙瞇,搅拌15min后,静置15mi

7、n;过滤;滤渣进行二次提取,加入乙醇与乙離(体积比为3:1)的混合液30ml,搅拌、静置一定时间;第二次过滤,合并二次滤液,加热浓缩至少量,加入一定量丙酮除杂,卵磷脂即沉淀出來,即得到卵磷脂粗品。方法二、称取10g蛋黄于小烧杯中,加入温热的95%乙醇30mL,边加边搅拌均匀,冷却后过滤。如滤液仍然混浊,可再次过滤至滤液透明。将滤液査于蒸发1111内,于水浴锅屮蒸干(或用加热套蒸干,温度可设140C左右),所得干物即为卵磷脂。(为了减少或尽可能不用乙瞇,实验采用方法二)2)、卵磷脂的纯化取一定量的卵磷脂粗

8、品,用无水乙醇溶解,得到约10%的乙醇粗提液,加入相当于卵磷脂质量的10%的ZnCb水溶液,宗温搅拌0.5h;分离沉淀物,加入适量冰丙酮(4°C)洗涤,搅拌lh,再用丙酮反复研洗,直到丙酮洗液为近无色1上,得到口色腊状的精卵磷脂;T燥;称重。3)、卵磷脂的溶解性试验卵磷脂的溶解性:取干燥试管,加入少许卵磷脂,再加入5mL乙醸,用玻棒搅动使卵磷脂溶解,逐滴加入内酮3〜5mL,观察实验现象。4)、卵磷脂的鉴定4.1三甲胺的检验取干燥试管一支,加

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