执业药师复习资料

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1、第六章色谱法药物分析课件西安交通大学药学院傅强fuqiang@mail.xjtu.edu.cn第六章色谱法考试大纲要求掌握薄层色谱法的基本原理、操作方法以及在药物鉴别、检查中的应用。掌握气相和高效液相色谱法的基本原理及其在药物鉴别、检查和含量测定中的应用。掌握气相色谱和高效液相色谱系统适用性试验的主要内容。熟悉电泳法的基本原理和常用的电泳方法。了解气相色谱仪和高效液相色谱仪的基本结构、毛细管电泳法的基本原理。第六章色谱法色谱法(chromatography)是建立在被分离组分在两相间具有不同分配特性基础上的分

2、析方法。静止不动的一相称为固定相（stationaryphase），参与运动的另一相称为流动相（mobilephase）。一、分离原理（一）分配平衡在色谱分离过程中，当温度一定时，认为组分在两相间的分配可以达到热力学平衡，此时组分在固定相中的浓度（Cs）与在流动相中的浓度（Cm）之比为一个常数，表示为：K=Cs/CmK为平衡常数（equilibriumconstant）。当色谱体系的固定相和流动相一定时，K是反映组分保留特性的参数，K值大，表明组分与固定相的作用强，易于保留；反之，则组分与固定相的作用弱，易于

3、进入流动相而被洗脱。由于不同组分其化学性质各异，就具有不同的保留特性或不同的K值，从而通过色谱方法得以分离。（二）保留参数色谱图（chromatogram）是由组分在柱中的浓度与流出时间作图形成的曲线。描述曲线特征的各种保留参数（retentionparameter），反映了组分在色谱柱中的作用和分离特性。1．保留时间组分从进样开始到柱后该组分出现峰值浓度时，所需的时间称为保留时间（retentiontime，tR）。而不保留组分从进样开始到出柱时，所需的时间称为死时间（voidtime，t0）。色谱图1．保

4、留时间：保留时间；死时间；调整保留时间。2．容量因子：由于保留体积的大小与柱的尺寸有关，不能完全反映组分的保留特性，所以引入容量因子（capacityfactor，k′）的概念。根据分配平衡定义的容量因子为：在一定温度下，组分在两相间的分配达到平衡时，其在两相中的绝对量之比。tR=t0（k′+1）（三）理论塔板（theoreticalplate）两个组分被分离的条件首先是它们有不同的K值或k′值，但也与峰的形状和宽度有关。为了描述色谱峰的宽度，引入理论塔板数（n）的概念。理论塔板数与柱长（columnleng

5、then，L）成正比。所以，柱的性能还可用塔板高度（plateheight,H）来表示。理论塔板概念被广泛用来描述色谱柱的特性，性能良好的色谱柱，其理论塔板数高，塔板高度值小，峰形窄而对称。（四）范氏方程（VanDeemterequation）1956年，VanDeemter提出了色谱中塔板高度受三方面的因素影响，并总结出了与流动相线速（u）有关的经验表达式称为范氏方程:1．涡流扩散项（A）：与固定相的粒度大小和均匀度有关，与流动相的性质无关。气相色谱中使用空心毛细管柱时，由于无填充颗粒，A项为零。2．分子扩

6、散项（B/u）：与组分在柱中的浓度梯度和分子的扩散运动有关，增加流速有利于克服由B/u项引起的色谱峰展宽。气相色谱中，B/u项是色谱峰展宽的主要因素；而液相色谱中，由于液态分子的扩散运动较低，B/u项可以忽略不计。3．传质阻力项（Cu）：与固定相的液层厚度和柱中流动相的迁移速度有关。组分进入固定相和从固定相返回流动相均需要一定的时间，所以增加流速将会造成分子质量迁移速度的差异，而引起色谱峰展宽。液相色谱中，Cu项是色谱峰展宽的主要因素。VanDeemter方程说明了填充均匀程度、载体粒度、载气种类、载气流速、

7、柱温、固定液层厚度对柱效的影响，对色谱条件的选择具有重要意义。二、色谱系统适用性试验方法1.色谱柱的理论塔板数（n）:达到规定要求；2.分离度(R):除另有规定外R应大于1.5；3.重复性(RSD):取对照品溶液,连续进样5次其峰面积测量值的相对标准偏差不大于2.0%；4.拖尾因子(T):除另有规定外，T应在0.95～1.05之间。在给定色谱条件下，相邻的两个色谱峰被分离的程度用分离度来表示。tR1，tR2，Wb1和Wb2分别表示第一个和第二个色谱峰保留时间和峰宽。一般Rs>1.5，认为两峰完全基线分离。三、

8、各种色谱法色谱法分类按两相状态分:气相色谱法气—固色谱法气—液色谱法液相色谱法液—固色谱法液—液色谱法按操作形式分：柱色谱法平面色谱法电泳法按分离机制分:分配色谱法吸附色谱法离子交换色谱法空间排阻色谱法亲合色谱法等（一）薄层色谱法薄层色谱法（thinlayerchromatography，TLC）是将固定相铺于平板上，利用流动相的毛细现象推动组分迁移，由于不同组分在两相间分配特性或吸附作用的差异，而