免疫共沉淀技术的应用研究

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1、中华针灸电子杂志2014年８月第３卷第４期ChinJAcuandMox（ElectronicEdition），August2014，Vol.３，No.4·170··综述·免疫共沉淀技术的应用研究樊同涛樊小农麻聪聪王晓光常女子【摘要】免疫共沉淀技术是研究蛋白质鄄蛋白质之间相互作用的重要方法之一，可以确定在生理状态下细胞内相互作用的蛋白质。在蛋白复合物的研究中，不仅可以用于验证其存在，还可以发现新的蛋白复合物。近来，中医药科研工作者应用此技术来揭示中医药的作用机制，取得了一些成绩。就近几年免疫共沉淀技术的应用研究做文献综

2、述。【关键词】分子生物学；多蛋白复合物；热休克蛋白质类；免疫共沉淀Applicationsofco鄄immunoprecipitationtechniqueFanTongtao*，FanXiaonong，MaCongcong，WangXiaoguang，ChangNüzi.*GraduateSchool，TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin300193，ChinaCorrespondingauthor：FanXiaonong，Email：fanxi

3、aonong@163.com【Abstract】Co鄄immunoprecipitationtechniqueisanimportantmethodtostudyinteractionbetweenprotein鄄protein,whichcanbeusedtodeterminetheinteractingproteinsintheintracellularphysiologicalstates.Inthestudyofprotein鄄proteincomplexes,itnotonlycanbeusedtoveri

4、fyitsexistence,alsocanbeusedtofindthenewcomplex.Recently,researchersoftraditionalChinesemedicine(TCM)haveutilizedthistechnologytorevealthemechanismofTCMandmadesomeachievements.Thisstudyreviewedapplicationsofco鄄immunoprecipitationtechniqueinrecentyears.【Keywords

5、】Molecularbiology；Multiproteincomplexes；Heat鄄shockproteins；Co鄄Immunoprecipitation免疫共沉淀（Co鄄Immunoprecipitation，Co鄄IP）技术因能揭示在生理条件下的蛋白相互作用而得到广术是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于泛应用。研究蛋白质相互作用的经典方法，用来确定两种蛋一、Co鄄IP简介白质在完整细胞内的生理性相互作用。随着后基因Co鄄IP的原理及操作：当细胞在非变性条件下组时代的来临，科学家们逐渐认识到蛋白质才是

6、细被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质鄄蛋白质间胞活性及功能的最终执行者，而蛋白质之间的相互的相互作用被保留了下来。假如细胞内存在XY蛋作用是蛋白质发挥功能的重要途径，因此对生物功白复合物，用X的抗体（最好是多抗或标签抗体）免能的研究已从单一的蛋白质过渡到对蛋白之间相互疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也被沉作用的研究。目前研究蛋白质相互作用的方法非常淀下来。沉淀经多次洗涤后，重悬于电泳上样缓冲多，包括酵母双杂交技术，GSTpull鄄down技术，免疫液，煮沸后离心收集上清。对上清进行蛋白印迹共沉淀技术和串联亲和

7、纯化技术等，其中Co鄄IP技（westernblot，WB）检测Y蛋白的存在，然后再用Y的抗体进行沉淀，用X的抗体进行WB检测X蛋DOI:10.3877/cma.j.issn.2095鄄3240.2014.04.004白，如果X、Y均出现，则说明XY复合物的存在。进基金项目：天津市应用基础及前沿技术研究计划（10JCBJC12700）行本实验应注意以下几点：（1）组织匀浆避免使用超作者单位：300193天津中医药大学研究生院（樊同涛、麻聪聪、王晓光、常女子）；天津中医药大学第一附属医院针灸研究所（樊小农）声，尽量采取

8、手动操作。（2）一定要用温和的裂解液，通讯作者：樊小农，Email：fanxiaonong@163.com以免破坏组织或细胞内存在的弱的相互作用。（3）设·171·中华针灸电子杂志2014年８月第３卷第４期ChinJAcuandMox（ElectronicEdition），August201４，Vol.３，No.4置阳性对照和阴性对照，排除假阳