蛇胆川贝枇杷糖浆限度检查操作方法

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1、计数检查72副皿需1440ml制备1500ml20ml/副Y玫瑰红钠琼脂培养基：匸52副皿需1040ml制备1200ml20ml/副蛇胆川贝枇杷糖浆限度检查操作方案一般供试品的检验量10g或10ml,要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品。一般应随即抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。对于口服给药制剂：细菌数每lg不得超过lOOOcfuo每1ml不得超过lOOcfuo霉菌和酵母菌数毎lg或1ml不得超过lOOcfu。

2、大肠埃希菌每lg或1ml不得检出。含蜂蜜、王浆的口服给跖制剂每10g或10ml还不得检出沙门菌。固体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液至100ml,用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1：10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80,并置水浴中适当加温使供试品分散均匀.一、抽样:取三瓶川贝枇杷糖浆，从每瓶中各抽取10g,混匀，即共30go二、培养基的制备数量厂营养琼脂培养基：r胆盐乳糖培养基:需800ml制备900ml100ml/瓶4-甲基伞形酮葡糖甘酸(MUG):需45ml制备50ml5ml/管

3、EMB或麦康凯琼脂培养基：需200ml制备300ml25ml/副细菌、霉菌、酵母菌计数三、计数培养基的适用性检查细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查，成培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。菌种验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存屮心获得的冷冻干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]枯草芽泡杆菌(

4、Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]口色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]黑曲霉(Aspergillusniger[CMCC(F)98003]菌液制备接种人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养1824小时；接种白色念株菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养24〜48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成毎lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。接种黑關霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5

5、〜7天，加入3〜5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将抱了洗脱。然后，吸出抱了悬液（用管门带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含他了数50〜lOOcfu的他了悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在两小时内使用，若保存在2〜8°C,可在二十四小时内使用。黑曲霉抱子悬液町保存在2〜8°C,在验证过的储存期内使用。适用世检圭；取大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孑包杆菌齐50〜lOOcfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备两个培养皿，混匀，凝固，置30-35°C

6、培养48小时，计数;取白色念珠菌，黑曲霉各50〜lOOcfu,分别注入无菌培养皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，毎株试验菌平行制备两个培养皿,,混匀，凝固,置23~28°C培养72小时,计数，同时,用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。若被检出的培养基上的菌落平均数不小丁对照培养基上的菌落平均数的70%,且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。四、计数方法的验证当建立跖品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。若药品的

7、组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。菌种及菌液制备同计数培养基的适用性检查。验证方法验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的冋收率。（1）试验组平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液51和50~100cfu试验菌，分别注入平血中，立即倾注琼脂培养基，毎株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。（2）菌液组测定所加的试验菌数。（3）供试品对照组取规定量供试液，按菌落计数方

8、法测定供试品木底菌数。（4）稀释剂对照组若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程屮微牛物受影响的程度。试验时，可用相应的稀释液替代