纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案2015年版药典上上2018年

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1、纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案起草部门：QC组签名：日期：审核部门：QC组签名：日期：部1J：质量部签名：日期：批准质量负贵人签名：日期：质量部颁发本文件根据需要应分发于以下部门：01质量部下表用于记录修订/变更主要内容及历史。文件编号修订原因修订口期按GMP（2010年修订版）及2015年版《中国药典》要求新制定1.概述2.验证目的和范围3.组织及职责4.验证进度计划表5.验证所需要的仪器设备的确认6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认7.验证项目和验证方法7.1试验菌株7

2、.2菌液制备7.3培养基适用性检查7.4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）8.偏差与漏项控制9.验证报告会审1.概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A培养基进行适用性试验。通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。2.验证目的和范围验证纯化水的需氧菌检查所用R2A培养基的适用性，对其有效性进

3、行评价，保证检验结果的可靠性。本验证方案采用1批按GMP要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。3.组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。3.2验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验

4、证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。3.4验证工作小组成员表姓名部门及职务职责质量负责人/质量受权人负责验证方案及报告的批准质量部QA组长审核验证方案、审核验证报告并协调工作质量部QC组长负责验证方案审核、实施、汇总报告及培训工作质量部QC负责验证方案起草、具体实施、报告工作4.验证进度计划表本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8月至2015年9月。5.验证所需要的仪器设备的确认左要检验仪器设备确认表序号仪器设备名称型号编号生产厂家1电子

5、天平2电热恒温水浴锅3恒温培养箱4压力蒸汽灭菌锅5生物安全柜6微生物限度检查仪7洁净工作台检查人/日期：复核人/日期:6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认6.1.试验菌种检查表序号菌种名称代码甘油菌种批号菌种内控缩写来源1铜绿假单胞菌CMCC(B)10104Pa中国食品药品检定研究院2枯草芽抱杆菌CMCC(B)63501Bs中国食品药品检定研究院检查人/日期：复核人/日期:6.2试验所需的培养基检查序号名称生产厂家是否通过培养基适用性试验批号01胰酪大H豚液体培养基□是□否02胰酪大豆

6、腺琼脂培养基□是□否03R2A琼脂培养基□是□否04R2A琼脂对照培养基□是□否检查人/日期：复核人/日期:6.3试剂序号名称规格级别生产厂家批号01pH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液干粉250g检查人/日期：复核人/日期:6.4.试剂及培养基呪制PH7.0氯化钠一蛋白腺缓冲液（冲洗液）：称取pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液干粉16.09go加水定容lOOOmL,微温溶解,滤清,分装至蓝盖试剂瓶,121°C湿热灭菌20min°胰酪大豆腺液体培养基：取胰酪大豆豚液体培养基29.8g,加1L纯化水，加热

7、助溶，分装至蓝盖试剂瓶,12VC湿热灭菌20mino胰酪大豆腺琼脂培养基：取本品40g,加1L纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121°C湿热灭菌20minoR2A琼脂对照培养基：取本品4.55g,加300mL纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121°C湿热灭菌20minoR2A琼脂培养基：取本品18.2g,加1L纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121°C湿热灭菌20mino7.验证项目和验证方法7.1试验菌种R2A培养基的适用性试验所用的菌株为本实验室-8O°C冰箱保存的铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌

8、的甘油菌，均为第2代。7.2菌液制备7.2.1•稀释液的配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液：称取pH7.0氯化钠-蛋白豚缓冲液干粉16.09go加纯化水定容lOOOmL；微温溶解，滤清，分装至1000n）L蓝盖试剂瓶中，121°C湿热灭菌20min。7.2.2.菌液的制备从-80°C冰箱取出铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌的第2代菌液，分别接种至10nd胰酪大豆腺液体培养基中，30〜35°C培养18〜24小吋。同吋分别划线接种至胰酪大豆腺琼脂培养基中，30〜35°C培养