不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程

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1、不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1•检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或i起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋口法和微柱凝胶法。3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（I、II、III套）起反应，以发现在37°C屮有反应活性的抗休。这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。4•

2、标木要求受检者不抗凝静脉血4.0ml,分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的0型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、LeLeK、k、FyFyJkJI?等。每次用3套试剂（I、II、III）进行抗体筛选，见表1005-E5・2•鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外述有：CKpKpJsJsb、LuLuiXr/mina等。每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）o5.4.致敏红细胞（质控细胞）。5.5.0.9%生

3、理盐水。5.6.Coombs微柱凝胶卡。6.器材试管、吸管、37°C水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。5.操作程序7.1•盐水介质法7.1.1.取受检者血清2滴于标记有I、II、III的3支小试管中。7.1.2.对应加入I、II、III套2%〜5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37°C孵育30分钟。7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1屮。如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。表1005-1红细胞血型筛选细胞反应格局表序号血型系Rh-hrKellDuffymiLewispMNSsLuth基因DcEceKkFyaFybJkaJ

4、kbLeaLebPlMNssLuaLubIR1R1++00++++00++0+0+++0+IIR2R2+0++00++++00+0+++00+niRlrl++0++0++0+00+0+00+0+试验结果（盐水法、抗球蛋口法、微柱凝胶法）IR1R1IIR2R2inRlrl注：+为阳性；0为阴性7.1.4再取受检者血清2滴于标记有1〜11的11支小试管中。7.1.5.在11支小试管屮分别加入11套2%〜5%鉴定谱细胞生理盐水悬液1滴,37°C孵育30分钟。7.1.6.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2屮表1005-2红细胞血型谱细胞反应格

5、局表序号血型系Rh-hrKellDuffyKillLewispMNSsLuth基因DcEceKkFyaFybJkaJkbLeaLebPlMNssLuLub1R/R.++00+0+++0+0++++++0+2RR++00+++0++00++0+0+0+3R2R2+0++00++0+00+++0+00+4r'r0+0++++++++00++++00+5〃rr00+++0+++0++00+0++0+6rr000+++0+00+0++0+0+0+7rr000++0+0+0+0+0++0+0+8Itr+00++0+00+00++++0+0+9rr000++0++++00+++0+00+10rr

6、000++++0+0++0++00+0+11rr000++0+0+0+00+++++++结果（盐水法、抗球蛋白法、微柱凝胶法）1R/Ri2RiR3R2R24r7r5〃rr6rr7rr8R°r9rr10rr11rr注：+为阳性；0为阴性；W为弱阳性7.2抗球蛋白法7.2.1.如果盐水法（1）〜（3）抗体筛选试验阴性，继续做以下试验。7.2.2.再振摇试管，使管底红细胞重新悬浮，用生理盐水洗涤3次。7.2.3.最后一次洗涤后，弃去全部盐水，将试管边缘盐水用滤纸吸干。7.2.4.立即加入多特异性抗球蛋白血清1滴，混匀。7.2.5以3000r/min离心10秒，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集和溶

7、血情况,并用显微镜确证，记录结果于表1005-1中。7.2.6.如果抗体筛选试验阳性，再取受检者血清2滴于标记冇1〜11的11支小试管屮。7.2.7.在11支小试管中分别加入11套鉴定谱细胞悬液1滴和多特异性抗球蛋白血清1滴，37°C孵育30分钟。7.2.8.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2中。7.3.微柱凝胶法（强生卡）7.3.1.在Coombs微柱凝胶卡上标记I、II、III,分别加入I、II、III