分子生物论文

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1、分子生物学作业学号：0914120130姓名：刘义2009级中药本一班山药中胆碱对流涎或唾液分泌过量治疗作用的研究一、研究背景:睡液是主要由三对大的睡液腺（下颔腺、腮腺和舌下腺）分泌入口腔，且下颔腺、腮腺和舌下腺分别提供其中的70%、25%和5%的量。涎腺是产生和分泌唾液的主要部位，由副交感神经及交感神经调节，但是主要是副交感神经起作用，主要对下颔腺调节。因此中枢和大脑皮质中枢的兴奋，引起唾液大量分泌。流涎在婴儿中是正常的,但有相当比例的发育缺陷患者主要曲神经肌肉功能障碍引起的流涎，由此影响吞咽。口唾液屮含有凝血因子、血

2、浆白蛋白、葡萄糖、氨基酸、枸椽酸、乳酸、尿素、尿酸、肌酸甘、脂肪酸、皮质类固醇和免疫球蛋白IgG、IgG、IgM等。腺细胞分泌或排出唾液是消耗营养物质和耗氧的主动活动过程。口角流涎症是2〜6岁小儿常见病。此病往往沾污衣服、枕被，很不卫生，好发于冬春季节，若B久不治，可使口角及下唇颌浸淫成疮。正常情况下唾液一天的分泌量为1000〜1500ml,12流涎即是睡液的分泌超过正常水平，睡液流速受神经控制，如使用氯氮平等产生的流涎副作用药品服用导致流涎或睡液分泌增多，有部分孕妇睡液也会不知不觉分泌增多。随着生活速度加快，人的社会压

3、力增大以及人们不正常的生活习惯，以及抑郁症导致睡液分泌过多的患者日益增多。流涎症已经成为困扰人们正常生活的疾病。忖前在国内治疗流涎的药品主要为胆碱受体阻断药，如阿托品，用量不同药效也会不同，必须在医生的监督指导下使用，不方便。胆碱受体阻断阻断药产生的副作用大，如对膀胱有强烈的刺激作用，不易于小孩等使用。第二种为芷闲胶囊，这是中药的合成剂，而且价格昂贵，且副作用以及作用机理不明确。第三种为格隆澳镀，为2010年7月，美国FDA批准了盐野义制药公司开发的格隆溟钱口服液，用于治疗3〜16岁儿童和青少年因大脑性麻痹等神经病学疾病

4、引起的慢性严重流涎。格隆溟钱为乙酰胆碱受体的竞争性抑制剂，其作用比阿托品好但是副作用与阿托品相似，用药的范用I小，且在国内的价格也相当贵。第四，中医理论下地针灸等中医治疗方法，不方便且不易于推广。因此研究治疗流涎或睡液分泌増多使用简便月.便宜的新型的药物是相当必要和紧迫。在小医理论上山药有健脾、除湿、补气、益肺、固肾、益精的功效，V山药含有可溶性纤维，能推迟胃内食物的排空，控制饭后血糖升高。能助消化、降血糖。山药中含有大量的胆碱类的化学成分。根据山药中胆碱为生物碱类，且具有与阿托品相似得结构。本文捉出山药中的胆碱可以治疗

5、流涎或睡液分泌过量。唾液分泌的调节完全是神经反射性的，包括非条件反射和条件反射。副交感神经兴奋时，其末梢释放乙酰胆碱作用于睡液腺使之分泌大量稀薄的、酶多消化力强的啞液。09如用乙酰胆碱或类似药时，可引起大屋唾液分泌，而用抗乙酰胆碱药（如阿托品），则能抑制唾液分泌。腮腺、颌下腺等外分泌腺含有M2和M3两种受体「以M2为主，腺体主要由胆碱受体体与乙酰胆碱结合后增加唾液的分泌毒蕈殓乙酰胆碱受体（mAChR）是膜受体家族的成员，通过与异三聚体鸟廿酸结合蛋白（G蛋白）偶联介导信号转导过程。二、预用的实验技术及资料本文拟通过制作变应

6、性流涎动物模型，观察山药胆碱对腺体的的影响检测流涎动物模型的唾液与其他各组以及又要前后的量的变化；并运用0L02-03克隆技术，⑴对M2和M3的mAChR进行研究（检测毒蕈殓乙酰胆碱受体表达和功能的调节及其介导新的信号途径）,注入药品后，M2和M3的对动物的唾液分泌的作用机理，同时与对照组进行对比。运用08HPLC-荧光检测法测定大鼠血浆及脑组织屮神经递质（乙酰胆碱）的含量，与阿托品组以及正常组进行对比。运用EFG（此技术冃前用于临床，检测六种脑神经递质的量的变化，从而判断病情，口前在屮国此技术很少使用，木文假设实验资金

7、充足情况下，将EFG改装能满足木实验的检测）监测乙酰胆碱的量，判断是否是山药胆碱的药物对神经的作用，并与阿托品组进行对比。三种方法确定山药胆碱的作用及位置。再用受体与山药胆碱结合，蛋白质技术测量G蛋白功能是否受其影响；做体外实验，用荧光标记法判断是否是山药胆碱与乙酰胆碱受体结合，发挥了药效作用。三、实验步骤与预期结果：1•提取并获得山药中的胆碱成分或通过购买（为了实验精确以及有精密设备最好是自己提取）；2.取8只大白鼠，雌雄各半，随机分配成三组，每组为一雌一雄。标记为Al,2组；Bl,2组；Cl,2组；El,2组。并测量

8、每只老鼠每分钟的分泌量。对各组老鼠分别滴入毛果芸香碱溶液的口腔内，0.02mg-0.04mg/kg,造成唾液分泌增多模型，然后A1,2给入山药胆碱，B1,2组注入阿托品，C1,2组滴入相同比例的生理盐水，E组作为正常组。初步测量其唾液的每分钟的分泌量量。预期A和B组的唾液比C,E组少。3.用山曲克隆技术分别对每组的大