草甘膦降解菌苍白杆菌G-1的分离鉴定及

《草甘膦降解菌苍白杆菌G-1的分离鉴定及》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、分类号0939学号2007116046硕士学位论文草甘麟降解菌苍白杆菌G-1的分离鉴定及草甘麟氧化还原酶基因gox的克隆张静指导教师桂中利教授专业学位微牛物学研究领域环境微生物答辩口期二零零九年十二刀ISOLATIONANDCHARACTERIZATIONOFGLYPHOSATE-DEGRADINGOchrobacteriumsp・STRAING-lANDCLONINGOFgoxGENEByZhangJingSupervisedbyProfessorCuiZhongliADISSERTATIONSubmittedtoNA

2、NJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFUFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSforMASTERDEGREECollegeofLifeSciencesNanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095CompletedinDecember,2009CommencementinDecember,2009原创性声明木人郑重声明：所呈交的学位论文，是木人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其

3、他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出巫要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者（需亲笔）签名：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保甜、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将木学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在—年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密

4、口。（请在以上方框内打）学位论文作者（需亲笔）签名：年月日导师（需亲笔）签名：摘耍ABSTRACT■■■■■■I......Ill符兮剧缩略语说明一、、-冃UI—Ivn文献综述一除草剂概述1二草廿麟生物降解及抗性研究进展2参考文献11第一章草H麟降解菌苍白杆菌G・1的分离鉴定错误！未定义书签。1材料与方法错误！未定义书签。2结果与分析错误！未定义书签。3结论26参考文献27第二章草廿麟降解菌株G1降解特性研究291材料与方法292结果与分析293结论35参考文献36第三章草廿麟氧化还原酶基因gox的克隆371材料与方法3

5、72结果与分析393结论41参考文献42全文总结43本文创新之处45附录一文屮所用培养基及试剂配方47附录二研究中获得的相关DNA序列49致谢51需格式的：缩进：首行缩进…字草甘麟降解菌苍白杆菌G-1的分离鉴定及草甘麟氧化还原酶基因go兀的克隆摘要草甘麟及其主要代谢产物氨甲酰磷酸(AMPA)对人体具有遗传毒性，2.5-7.5mM的草甘勝会对DNA产生明显的毒害作用，而1.8mM的氨甲酰磷酸(AMPA)就会对人体淋巴细胞产生明显的诱裂作用。美国一项农业健康调查报告显示，草甘腸及其代谢产物可以诱发多发性骨髄瘤，至于一些罕见癌

6、症是否也与此有联系还需要长期的研究与观察。自然界中存在丰富的降解草甘麟的微生物资源，从这些微生物中克隆的草甘腸降解基因在抗草甘麟转基因作物中有着广泛的应用。从长期受农药污染的环境样品中通过富集培养的方式分离到一株草甘麟高效降解菌，通过16S「RNA基因同源性比较和生理生化鉴定，初步将其鉴定为苍白杆菌属{Ochrobacterumsp.),命名为G-1。菌株G-1在LB培养基上菌落呈圆形，表面凸起，光滑，湿润，边缘规则；在电镜下观察，该菌呈短杆状，没有鞭毛，细胞周围有分泌物；接触酶阳性，腺酶阳性，柠檬酸盐阳性，酯酶阴性，亚

7、硝酸盐还原阳性，不能水解淀粉，不能不能水解明胶；最适生长条件为：pH7.0，温度30°Co好氧性生长，对氨节青霉素、卡那霉素、庆大霉素、壮观霉素有抗性，对四环素、氯霉素、利氟平、呐定酮酸敏感。G-1能在24小时内降解浓度为300mg/L草甘勝，降解效率明显高于以往分离得到的草甘麟降解菌。初始浓度对降解效率有明显影响，初始浓度越高降解时间越长；其最适降解条件为3()°C.pH7.0;Cu2+.Ni?+对草甘麟的降解有明显的抑制作用,Zn2C/+有一定的抑制作用，KFe叭对降解无明显影响。根据已公布的草甘腸氧化还原酶结构

8、基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增从降解菌G-1中克隆到草甘瞬氧化还原酶的gox基因，gox结构基因共有1296个碱基,编码431个氨基酸和一个终止密码子。将基因序列在NCBI上进行同源性比较，发现该基因与Chelativoranssp.BNC1(CP000389)中的gox基因同源性达99%。将克隆的gox基因