阿奇霉素检查技术分析

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1、阿奇霉素检查技术分析［摘要］目的建立阿奇霉素原料的微生物限度检查方法。方法采用离心沉淀、薄膜过滤与冲洗液加入增溶剂并保温的方法消除阿奇霉素的抗菌活性。结果各试验菌的回收率均大于70%,控制菌结果呈阳性。结论该方法可作为阿奇霉素原料的常规微生物限度检查方法。［关键词］阿奇霉素中图分类号：TH365文献标识码：A文章编号：1009-914X（2014）10-0390-01阿奇霉素是新一代大环内酯类抗生素，为红霉素结构修饰的产物，主要通过与敏感微生物的50S核糖体作用抑制细菌蛋白质的合成起作用。与红霉素相比，其抗菌谱有所扩大，抗菌活性也冇所增强。阿奇霉素原料作为生产各

2、类阿奇霉素制剂的主要物料，其卫生学水平须达到相应制剂的水平。本组试验所用阿奇需素原料主要用于生产口服制剂，根据《中国药典》2010年版要求，口服制剂须进行细菌、霉菌及酵母菌以及大肠埃希菌检查,故本次试验対阿奇霉素的细菌、霉菌及酵母菌计数、控制菌检查分别进行讨论。1仪器与材料1.1仪器MilliflexPlusPump（密理博）、TDL-40B低速台式大容量离心机（无锡市瑞江分析仪器有限公司）、电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）、ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）、LRII-250F型生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）、HH-S6数显双列六孔水浴

3、锅（金坛市医疗仪器厂）0.45um2混合纤维素酯膜（密理博）1.2供试品阿奇需素（南京先声东元制药有限公司提供）。1.3培养基与缓冲液营养琼脂培养基（批号:110307）.玫魂红钠琼脂培养基（批号：1102212）、胆盐乳糖培养基（批号：1012012）、MUG培养基（批号:101020）、营养肉汤培养基（批号:101124）均购自北京三药科技开发公司。各培养基适用性根据《中国药典》2010年版检查均符合规定。pH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液（批号：20110419）购自青岛蓝雁绿检生物技术有限公司。1.4菌种大肠埃希菌［CMCC（B）44102］、金黄色葡

4、萄球菌［CMCC（B）26003］、枯草芽抱杆菌［CMCC（B）63501］、白色念珠菌［CMCC（B）98001］、黑曲霉［CMCC（F）98003］均购自中国药品生物制品检定所，所有试验菌传代次数均不超过5代。2方法［2］和结果2.1菌液制备接种金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌、人肠埃希菌新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30〜35°C培养18〜24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23〜28°C培养24〜48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基斜面上,23〜

5、28°C培养5~7天，加入3~5ml含0.05%（ml/ml）吐温80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孑包子洗脱，用含0.05%（ml/ml）吐温80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含抱子数小于lOOcfu的砲子悬液。2.2供试液制备称取供试品10g,加pII7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液至100ml,混匀,作为1：10供试液。细菌计数及控制菌检查取1：10供试液80ml于500rpm离心2分钟，备用。霉菌及酵母菌计数取未经离心的1：10供试液，备用。1.3回收率计算试验组：取供试液，照下列2.4及2.5项的计数方法，培养基稀释法取供试液及试验菌混匀后倒培养基

6、计数，薄膜过滤法在最后一次冲洗液中加入试验菌过滤后将滤膜贴在培养基平板上计数。菌液组：取各试验菌，与试验组相同（不加供试品）操作后计数。供试品对照组：取供试液，与试验组相同操作（不加试验菌）后计数。稀释剂对照组：用等量稀释剂代替供试液，与试验组相同操作后计数。试验组冋收率二（试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落）/菌液组平均菌落数X100%；稀释剂对照组回收率二稀释剂对照组平均菌落数/菌液组回收率X100%o1.4细菌计数方法验证试验细菌计数取1：10供试液离心后的上清液作为供试液，分别用培养基稀释放、薄膜过滤法试验。培养基稀释法取供试液lml平均分配至5个培

7、养皿中，再分别加入50~100cfu/m1的试验菌lml,注入45°C的营养琼脂培养基计数；薄膜过滤法取供试液lml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液至100ml,过滤，分别用不加处理的pH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液及加入吐温-80并预先于45°C保温的pH7.0无菌氯化钠-蛋白腺缓冲液冲洗。2.5霉菌及酵母菌计数验证试验转霉菌及酵母菌计数取未经离心的1：10供试液采用平皿法和培养基稀释法同时试验。培养基稀释法取lml供试液平均加至2个培养皿中，0.5ml/皿，再分别加入lml的试验菌，倾注玫瑰红钠琼脂培养基后培养计数。2.6控制菌检查验证试验根据《中

8、国药典》2010年版二部