实验动物及动物实验基本操作技术

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1、2021/7/221第三军医大学实验动物中心2021/7/222实验动物及动物实验基本操作技术SPF级屏障系统下操作规程实验动物的抓取与固定性别鉴定和年龄的判断妊娠检查处死方法第一节:操作规程一、人员及物品的进出1、人员严格按照人员“入室流程”进出动物实验室，并指导和监督其他实验人员及工作人员按规程要求进出动物实验室，并作好登记。2021/7/223入室流程洗手→刷牙→换鞋→一更衣室更衣→消毒室手脚浸泡消毒(2min)→二更衣室（穿无菌服、戴口罩）→穿拖鞋、戴手套→清洁走廊→饲育室→亚清洁走廊→缓冲间→内厅。注：进出房间时随手关紧各室的门，不得同时开两扇门，不得逆向行走

2、。2021/7/224二）、物品走向A:物品传入1、高压蒸汽灭菌锅使用：水瓶（水）：预热→升温→灭菌（121℃,31min）→自然冷却→结束饲料、垫料、鼠盒、衣服：预热→三次脉动真空→升温→灭菌（121℃,8min）→排气→干燥（8min）→补气结束2、传递窗使用：1）动物传入检查动物外包装(有无漏气)→开外门→消毒液喷洒仓内和运输盒→放入运输盒→喷洒消毒液→关门→开启内门并喷消毒液→传入动物→核查验收动物并做好纪录。2）灭菌物品传入开外门→喷消毒液→放入仓内→喷洒消毒液→关门，开紫外灯（30min以上）→关灯，开内门并喷消毒液→传入B:物品传出：从传递窗或污染走廊传出

3、。2021/7/225二、进入动物实验室后作好当天的温室度、压强等纪录。三、准备当天工作所需物品（包括鼠笼、饮水、消毒液、饲料等）。实验室要准备好当天实验所需的动物，器材等。2021/7/226四、入室饲育工作：1、换笼（每周一次），同时加饲料和饮水。负责实验的人员要及时和实验人员沟通，根据其实验需要进行适量的断乳和动物保种（动物保种要根据动物各个品系的遗传背景进行繁殖）。2021/7/2272、卫生和消毒：周一→周五日常消毒（擦拭层流架、工作台、拖地等）。每周四对屏障系统内所有物品进行消毒（包括地面、墙壁、天花板等）以及喷雾消毒。注：消毒时要配比适当、交叉使用消毒液、

4、消毒彻底、不留死角。2021/7/2283、日常管理：观察动物情况（实验处理后动物情况、生产、生长情况）并作好纪录。检查饲料和饮水，水瓶有无漏水等。协助实验人员做好卫生工作，带出废弃物于指定地点，并检查仪器电源、笼盖、门等是否关好。2021/7/2294、其他工作：每两周更换一次屏障设施内挡风板，每个月清洗一次初、中效过滤网。每月作好动物报表，引进多少只老鼠、生产多少只老鼠等。2021/7/22102021/7/2211一、大、小鼠的抓取固定第二节实验动物的抓取与固定2021/7/2212小鼠固定盒固定2021/7/2213大鼠固定盒固定2021/7/2214二、豚鼠的

5、抓取固定法2021/7/2215三、家兔的抓取固定法2021/7/22162021/7/2217一、大、小鼠的性别鉴定第三节(A)性别鉴定2021/7/2218FemaleMale二、兔的性别鉴定2021/7/2219一、大、小鼠1.根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样）第三节（B)年龄的大致判断日龄/d外观形态特征1仔鼠裸体鲜红3耳壳露出表皮4脐带瘢痕脱落5能翻身8能爬行2021/7/2220日龄/d外观形态特征10能听到声音9～11全身被白毛，门齿长出13～15眼皮张开，能跳跃，能抓取东西18以后能自行采食，独立生活2021/7/22212021/7/2222202

6、1/7/22232021/7/22242021/7/22252021/7/22262021/7/22272.根据体重鉴定日龄⑴小鼠日龄与体重的对应日龄/d初生51015202530体重/g1.846111521212021/7/2228⑵大鼠日龄与体重的对应日龄/d初生10203040体重/g6～717～2535～5055～90100～150日龄/d50607080体重/g150～210170～240210～270240～3202021/7/2229二、豚鼠一般老年豚鼠牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神呆滞，行动迟缓。而年轻豚鼠牙齿短白，爪短软，眼睛圆亮，行动敏捷，被毛

7、有光泽，且紧贴身体。同样，也可根据体重来推断大致年龄。同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性。与大鼠一样，其体重受多种因素的制约。实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄。日龄/d初生7203060体重/g60～80100～120150～200170～220240～300日龄/d90120180体重/g330～400400～470520～6002021/7/2230三、家兔家兔的门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴别的重要标志。青年兔门齿洁白，短小，排列整齐；老年兔门齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损。白色家兔趾小基本呈红色，尖端呈白