茯苓酸提取方法研究

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1、茯苓酸提取方法研究【摘要】目的：建立茯苓酸的含量测定方法。方法：反相高效液相色谱法、保留时间定性和外标两点法定量。结果：茯苓酸的最佳提取方法为为把茯苓粉末过60目筛后用甲醇超声提取1小时。结论：该提取方法稳定可行，适用于茯苓酸的提取。茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poriacocos（Schw.）Wolf的干燥菌核。其味甘、淡、平、归肺、胃、肾经。具有利水渗湿，健脾宁心的功效。用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便澹泄泻，心神不安，惊悸失眠［1］。茯苓酸为四环三砧酸，是茯苓中的主要活性成分之一［2〜3］,具有增强人体免疫力、抗癌、增强胰岛素的分

2、化诱导及止吐等作用。本文采用高效液相色谱法，建立其含量测妃方法，为茯苓的质量评价提供依据。1、仪器与材料1.1仪器与试药1.1.1仪器LC200高效液相色谱仪（美国PE）；PL-203电子天平（瑞±）；HUMANpowerl（Scholar）纯水/超纯水系统（韩国）；SK-18TC超声波清洗器。1.1.2试剂试剂乙月青为色谱，纯水为自制高纯水，其他试剂均为AR。茯苓酸对照品。2、高效液相色谱条件的选择用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂（DiamonsilC18,4.6X250nm,5um）；柱温25°C；乙ffi-O.4%乙酸（85：15

3、）为流动相；流速ImLmin-l；206mn检测。此条件下，茯苓酸和样品中的其它物质可以达到良好的分离。3、方法与结果3.1对照品溶液制备精密称取茯苓酸对照品4.9mg,用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中，摇匀。即配制得0.49mg/mL的茯苓酸对照品溶液。3.2标准曲线的制备在上述色谱条件下分别精密吸取对照品溶液（0.49mg/mL）2ul.4ul、6ul.8uKlOul注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积为横坐标茯苓酸进样质量为纵坐标，绘制标准曲线。茯苓酸质量在0.49ug-5.88ug范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性回归

4、方程为：Y二2.059X10-6X-0.121146,相关系数r•二0.9997。3.3提取条件的考察[4〜6]3.3.1提取溶剂的考察取茯苓药材粉末（60目）约2g共5份，精密称定，分别加入甲醇、无水乙醇、乙瞇、氯仿、丙酮20mL,超声提取30min（中途补充损失的溶剂），取出，放冷，过滤；用微孔滤膜（0.45ul）滤过，各进样20ul进行液相色谱分析。不同溶剂对测定结果的影响结果见表l-lo表IT提取溶剂对测定结果的影响（门二3）溶剂甲醇无水乙醇乙醯氯仿丙酮茯苓酸含量（%）0.06250.05620.05250.04470.039

5、5以上结果表明，甲醇作为提取溶剂，得到的茯苓酸的含量最高，故选择甲醇作为供试品溶液制备的的提取溶剂。3.3.2提取方法的考察取茯苓药材粉末（60目）约2g,精密称定，置100mL三角瓶屮，共3份，分别加入20mL甲醇，称定重量，釆用超声45min、热回流3h、冷浸24h的提取方法；取出，放冷，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过。取续滤液用微孔滤膜（0・45ul）滤过，各进样20ul进行液相色谱分析。结果表明，超声法提取含量最高，故选择超声处理法作为供试品溶液制备的提取方法。3.3.3提取时间的考察取茯苓药材粉末（过60目筛）约2g,精密

6、称定，置lOOmL三角瓶中,共6份，分别加入20mL甲醇，称定重量，超声提取15min.30min>45min>60min.90min>120min,取出，放冷，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过。取续滤液用微孔滤膜（0・45ul）滤过，各进样20ul进行液相色谱分析。对提取时间进行考察结果见表1-20表1-2提取时间对测定结果的影响（n二3）时间（min）1530456090120茯苓酸含量（%）0.05610.05790.05960.06190.06370.0612以上结果表明，超声处理90分钟提取含量最高，故确定提取时间为90分钟

7、，供试品溶液采用超声处理90分钟。3.3.4粉碎粒度的选择分别取茯苓夯材粉末20目、40目、60目、80目约2g,精密称定，置lOOmL三角瓶中，加入20mL甲醇，称定重量，超声提取90分钟，取出,放冷，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过。取续滤液用微孔滤膜(0.45ul)滤过，各进样20"进行液相色谱分析。结果表明，药材粉碎粒度为60目时，提取的茯苓酸含量最高，故确定药材粉碎过60目筛。4、讨论本研究筛选出茯苓酸提取条件为把茯苓粉末过60目筛后用甲醇超声提取1小时。该提取方法稳定可行。超声提取方法简便，提取率高，比常规提取方法的操作时

8、间缩短10一20倍。超声提取天然药物有效成分具有周期短、成本低、不破坏活性成分等显著优点，用于茯苓酸的提取可以节约成木，提高效率。参考文献[1]国家夯典委员会.《中华人民其和国约》2010年版(一部)[M].化学工业岀版