资源描述：
《化工原理实验指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实验一分光光度计性能检测【实验目的】1、掌握分光光度计的性能检测，包括波长检测、杂光检测以及比色皿配对。2、掌握分光光度计的使用方法。【实验原理】1、波长检测：⑴可见光区域的黄光波段比较狭窄，适用于光度计波长的粗测；⑵锵钱滤光片在529nm±l〜处有较好的吸收峰，适用于光度计波长的细测。2、杂光检测：错钱滤光片在585nm处吸光度A最大，透光率T最小，所产生的透光与杂光成止比，因此可用其透光率表示杂光的人小。3、比色皿配对：一套比色皿Z间的材质、厚薄、色泽、空白吸收等应该一致，误差小于0.5%才能配套使用。【试剂与器材】1、铿做滤光片、白纸条、黑
2、纸片、蒸饰水等；2、722型分光光度计、比色皿。【操作步骤】一、操作1、波长检测(1)粗测：调仪器波长旋纽至580mn处，打开遮光板，在比色槽中光路经过处放一白纸条，观察是否有均匀的黄光。(2)细测：调波长至529nm处，打开遮光板，调0%T,盖上遮光板以空气调100%T,将错钱滤光片插入光路，测出A值。再在529nm附近每隔1〜2mn,各测其A值。2、杂光检测⑴调波长为585nm,盖上遮光板，用黑纸挡住比色皿光路，调0%T。(2)盖上遮光板，用空气作空白调100%T。(3)插入错钱滤光片，盖上遮光板，测ill585nm时的T%,即为杂光水平。3
3、、比色1111配套⑴选取儿支大小、材质、色泽相同的比色皿，洗净，装入占比色皿体积2/3的蒸谓水(D.W.),擦T，放入比色槽。(2)在585nm处，调第1支比色皿透光度为100%T,依次测出其他几支比色皿的T%。不合格的需反复剔除极端值，或重新配对，直至有2个以上的比色1111合格。二、结果及讨论【参考范围】1>波长的检测：在529nm±lnm处有最人吸收值为合格。2、杂光的检测：T%<5%为合格。3、比色皿配套：Tmax%-Tniin%<0.5%为合格比色皿配套。【注意事项】1、722型分光光度计的使用方法：选定检测波长，置调节模式为透光率T,
4、将某一盛装参比介质的空口比色皿置于光路，打开遮光板，调0%T,盖上遮光板调100%T,再将盛装待测液体的比色皿置于光路，测出T值，或置调节模式为吸光度A,即可测出A值。注意每次测定均盂重新调0%T、100%To2、在杂光检测中，用于调0%T的黑纸片应完好无孔洞，否则会导致假合格现象。3、使用比色皿时，其盛装液体不能超过总体积的2/3,也不宜少于1/2,且在检测前必须用擦镜纸将比色1111外的液休擦拭干净。实验二方法学评价试验（1）——线性范围试验【实验冃的】1、掌握线性范围试验的原理及方法。2、掌握葡萄糖氧化酶■过氧化物酶（GOD・POD）法测定
5、葡萄糖（Glu）。3、熟悉分光光度计的使用。【实验原理】使川不同浓度的葡萄糖标准溶液，川GOD-POD法试剂测定各自的吸光度，以标准浓度为横坐标,以其对应的吸光度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制出一条肓线，即剂量反应曲线。一般测定方法的线性范围要求能覆盖临床上的参考值和常见疾病的医学决定水平，以减少标木稀释重测的机会。【试剂与器材】1、蒸帑水，Glu标准液，GOD-POD法酶试剂。2、722型分光光度计，比色1111。【操作步骤】一、样品的处理与测定1、原始的匍萄糖标准溶液浓度为110mmol/L，设为第1号管，将其稀释后得到2种高浓度的匍萄糖
6、标准溶液管：笫2、3号管。注意稀释后要混匀。2号管3号管11Ommol/L葡萄糖液（卩1）10050D.W.(卩1)5050衙萄糖液浓度（mmol/L）73.33552、再将笫2、3号管分别収50卩1,加D.W.50M依次作等倍稀释（各4管），得到8种较低浓度的葡萄糖标准溶液，稀释方法见卜•图：UUUUUUUUUU管号浓度（mmol/L）3、収12支试管,246873.3336.6718.339.1其中设有空白管(B)。1074.58按下表操作：355527.5713.7596.88113.44试管编号B1234567891011D.W.(pl)
7、10葡萄糖标准液（卩1）1010101010101010101010酶试剂（ml）1.51.5L51.51.51.5L51.51.51.51.51.5混匀,37°C水浴15分钟,取岀冷却至室温,在5O5nm处用0.5cm的比色皿，B管调零，测各管吸光度吸光度A0标准液浓度C011073.335536.6727.518,3313.759」76.884.583.44(mmol/L)二、绘制A・C曲线在坐标纸上，以吸光度A为纵坐标，葡萄糖浓度C为横坐标绘制A-C线。三、结果及讨论【参考范围】该方法的线性可达22.24mmol/Lo【注意事项】1、Glu
8、标准液的加入量必须十分准确，应用计量性能准确度很高的微屋进样器加样。准确加量是最主要的技术关键。这对于后面所有需要微量加样的定量实验均是
