《第二部分动物生理学》实验指导书

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1、动物生理学实验指导书实验一基本生理实验操作——蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备（2学时）［实验目的］学习生理学实验基本的组织分离技术；学习和掌握制备蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的方法；了解刺激的种类。［实验原理］蛙类的一些基木生命活动和生理功能与恒温动物相似，若将蛙的神经-肌肉标木放在任氏液中，其兴奋性在几个小时内可保持不变。若给神经或肌肉一次适宜刺激，可在神经和肌肉上产生一个动作电位，肉眼可看到肌肉收缩和舒张-•次，表明神经和肌肉产牛了-•次兴奋。在牛理学实验屮常利用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴奋、兴奋性；刺激与反应

2、的规律和肌肉收缩的特征等，制备坐骨神经腓肠肌标木是生理学实验的一项基木操作技术。［实验对象］蟾赊或蛙［实验药品］任氏液、食盐、1%H2SO4滤纸［仪器与器械］普通剪刀、手术剪、眼科蹑（或尖头无齿银）、金属探针（解剖针）、玻璃分针、蛙板（或玻璃板）、蛙钉、细线、培养皿、滴管、锌铜弓（或电了刺激器）、酒精灯。［实验方法与步骤］（一）标木制备1.破坏脑脊髓：左手持蛙，用食指下压吻端，拇指按压背部，使蛙头前俯；右手食指沿两鼓膜」［沖向后触摸，触及一凹陷处，即枕骨大孔。用蛙针由凹陷处乖直刺入枕骨大孔，再向前伸入颅腔，捣毁脑；向后插入

3、椎管，捣毁脊髓。或把铁剪刀插入口裂，沿两眼后缘剪去头，再以蛙针捣毁脊髓。待蛙四肢肌肉紧张性完全消失，即表示脑和脊髓己破坏完全。2.剪除躯干上部及内脏：在腋部用铁剪刀剪断脊柱，将头、前肢和内脏一并弃去，仅保存一段脊柱和后肢。脊柱的两旁可见坐骨神经从。3.剥皮：先剪去肛门周I韦I皮肤，然后用左手捏住脊柱断端，右手捏住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤。标本放入盛有林格液的小烧杯中，将手及用过的器械、蛙板洗净，以免皮肤分泌物污染神经-肌肉标本。若标本系电生理实验用则禁止撕皮，需用剪刀剪断皮F结缔纟R织来分离皮肤。4.分离标本为两

4、部分：沿脊柱正中线将标本均匀地分成左右两半，分别作进一步剥制。5.游离坐骨神经：用大头针将蛙下半身俯位固定在蛙板上，用玻璃分针在半膜肌和股二头肌Z间分离出坐骨神经。注意分离时要仔细川剪刀剪断坐骨神经的分支，勿伤神经干，前面分离至脊柱坐骨神经从基部，向卜-分离至膝关节。保留与坐骨神经相连的一小块脊柱，将分离岀来的坐佇神经搭于腓肠肌上，去除膝关节周围以上的全部人腿肌肉，用铁剪刀刮净股骨上附着的肌肉，保留下半段股骨。6•分离腓肠肌：在跟腱上扎牢一线，提起结线，剪断结扎线外的跟腱，游离腓肠肌至膝关节处，将膝关节以下小腿其余部分全部

5、剪去。至此，标木制成（图2-1）o7.标本的检验：将标本證于蛙板上，川锌铜弓（或电子刺激器）刺激坐骨神经，若腓肠肌收缩表明标木的兴奋性良好。将标木放入林格液屮待用。注意事项：1•制备标本过程中，应随时用林格液润湿神经和肌肉，防止干燥。2.游离神经时，切勿用玻璃分件逆向剥离，以防损伤神经干，又要避免金属器械对神经的不必要触碰。3.避免蟾赊皮肤分泌物和血液等污染标本，也不能用水冲洗标本。圈5.1-2聘除能干农内廉.1Twins5.1-4分离坐骨神经（A）和坐骨神经腓肠an标本（B）实验二血液实验（4学时）1红细胞比容的测定［实

6、验目的］学习和掌握测定红细胞比容的方法。［实验原理］将定虽的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中，定时、定速离心后，冇形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，町计算出红细胞在全血屮的容积比值，即为红细胞比容（压积）（图6.1~1）«［实验对象］动物种类不限［实验药品］草酸盐抗凝剂（0.8g草酸钾・H20+1.2g草酸銭・IkO+甲醛1ml+蒸馅水至100ml）或10g・L-1肝素，橡皮泥或半融化状

7、态石白"蜡,75%酒精。［仪器与器械］毛细玻璃管（内径1.8mm,长75mm）或温氏分血管，酒精灯，水平式高速毛细管离心机（或普通离心机），天平，注射器，长针头，干棉球，刻度尺（精确到mm）。图6・1-1"仔成分的比容［实验方法与步骤］1.微量毛细管比容法（1）以抗凝剂湿润毛细管内壁后吹出，让壁内自然风T或于60°C〜80°CT燥箱内T燥后待用O（2）取血：常规消毒，穿刺指（或尾）尖，让血口动流出，用棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出后，将毛细管的一端水平接触血滴，利用虹吸现彖使血液进入毛细管的2/3（约50mm）处。（3）

8、离心：用酒粕灯溶封或橡皮泥、石蜡封堵其未吸血端，然后封端向外放入专用的水平式毛细管离心机，以12000r・min-1的速度离心5min。届时用刻度尺分别量出红细胞柱和全血柱高度（单位血）。计算其比值，即得出红细胞比容。1.温氏分血管比容法（1）取人试管和温氏分血管各一支，用抗凝剂处理后烘干备用。（2）取