(精选)作业指导书

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1、金华龙鼎检测技术有限公司LONGDINGJINHUADETECTIONTECHNOLOGYCO.丄TD・作业指导书文件编号：JHLD/ZD-2012编制：检测部、质管部受控状态:审批:分发号:版本号：第A版持有部门:2012年04月05日实施2012年04月01日发布公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定GB/T18204.1-20001、定义1.1、撞击法采用撞击式空气微生物采用器采用，通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产牛高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37°C.48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采

2、样测定方法。1.2、自然沉降法直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min,37°C、48h培养后，计数生长的细菌菌落的釆样测定方法。3操作步骤3.1设置采样点时，M根据现场的人小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为一采样点，该交点与四墙角连线的中点为另4个采样点。采样高度为1.2-1.5im采样点应远离墙壁lm以上，并避开空调、门窗等空气流通处。3.2将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴歸5min,盖上皿盖，翻转平板，置36°C±1°C恒温箱中，培养48h。3.3计数每块平板上牛长的菌落数，求出全

3、部采样点的平均菌落数。以每平皿菌落数(cfu/JUl)报告结呆。公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定GB/T18204.2-20001定义细长细菌总数：指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后(培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等),1cm,表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一祥在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。3操作步骤3.1采样方法3.1.1随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。3.1.2用灭菌生理盐水湿润棉拭子,在茶具内、外缘，涂抹50cm,,即1-1.5cm高处一圈。用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分

4、，将棉拭子放人lOmL牛理盐水内，4h内送检。3.2检验方法3.2.1将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1:10稀禅液。3.2.2以无菌操作，吸取2mL检样，分别注人到两块灭菌平1111内，每皿1讥。如污染严重，可十倍递增稀样，即吸取lml加到9mL灭菌生理盐水屮，混匀，此液为1100稀解液。每个稀解度做两块平皿。3.2.3将已融化冷至45C左右的营养琼脂培养基倾人平皿，每皿约15mL,并立即旋摇平皿。冷凝后放36C±1°C培养箱培养48ho4菌落计数方法:式中：a——细菌总数，cfu/cm2B——平均菌落数n——稀释倍数公共场所茶具微生物检验方法大肠菌

5、群测定GB/T18204.3-20001定义：大肠菌群指一群在37°C、24h能发酵乳糖、产酸、产气、協氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以次作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫牛:质量。2操作步骤2.1采样方法2.1.1随机法：随机抽取清洗消毒后准备使川的毛山、床上卧具。2.1.2涂抹法：用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。2」.3纸片法：用灭菌生理盐水湿润5cmx5cm大肠菌样快速测定纸片两张，分别贴在毛巾、床上卧具规定部位和而积范围内，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。2.2检验方法2.2.1发酵法2.2.1.

6、1用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。置36OC±1OC培养箱內培养24ho2.2.1.2观察是否产酸、产气，若有变黄和气体产住，该管推测是检验阳性。如不产酸、产气则为大肠菌群阴性。2.2.1.3自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置36°C±1°C培养箱培养18〜24h,然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。2.2.1.4在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1〜2个进行染色镜检；同时接种乳糖发酵管，只36°C±1°C培养24h。2.3纸片法将已采样的纸片置36°C±1°C培养箱内培养16〜18h

7、,观察结果。公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法细菌总数测定GB/T18204.4—20001定义：细菌总数：指被检物品经过采样处理，在一定条件卜-培养后，(培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等)25enF表而上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数主要作为判定公用毛巾、床上卧具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用毛巾、床上卧具清洗消毒效果的判定和评价提供依据。2操作步骤2.1采样方法2」」随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。2.1.2用灭菌住理盐水湿润棉拭子

8、，在毛巾、枕巾对折后两面的中央各25cm2(5cmx5cm)面积范围｝床单、被单