上海蜂妮医药科技有限公司的产品管理模式

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1、蜂妮活性多肽系列产品中肽类及蛋白成分分析1.实验目的通过液-质联用技术对处理后的固体颗粒样品进行蛋白质组搜库分析。2.实验原理将蛋白质经水解后的肽段混合物经过除盐后首先进入液相色谱，实现初步分离。经液相色谱分离后的肽段先经过质谱的第一级一离子源（如ESI）使肽段离子化并形成分散的离子。接着选择部分强度较高的肽段母离子进入质谱的第二级系统（碎裂源）做进一步碎裂，使肽段离子被打碎成更小的、有规律的碎片离子。理论上蛋白质序列经过酶解后形成肽段，肽段再经过理论二级碎裂形成理论的二级碎片离子谱图。然后用实验产生的MS/MS谱图信息（主要包括质荷比、离子强度）与理论产生的MS/MS谱图信息比对，通过比

2、较两者的相似度来确定谱图对应哪个肽段/蛋白。3.实验方法：3.1主要设备和耗材3.1.1主要设备和耗材试剂名称生产厂家型号C18色谱柱德国迈克Reprosil-PurC18-AQ,1.9um250*0.075mm质谱仪ThermoQExactivePlusOrbitrapMS液相色谱仪ThennoEASY-nLC12003.2样品制备3.2.1样品信息样品名称规格样品中主要相关成分描述来源Al（细胞康）0.7g/片海参肽、牡蛎肽、牛初乳粉、大豆肽、人参肽、蛹虫草、海洋鱼低聚肽崔立老师提供A2（细胞康）0.5g/粒海参肽、牡蛎肽、牛初乳粉、大豆肽、人参肽、蛹虫草、海洋鱼低聚肽B（海参牡蛎肽）

3、0.5g/粒海参肽、牡蛎肽、人参肽、黄蔑、党参、浓缩乳清蛋白、酪蛋白、复合矿物质C（鱼胶海参肽）0.5g/粒海参肽、海洋鱼低聚肽、鱼胶原蛋白肽、大豆肽、乳清蛋白粉、党参、大豆分离蛋白-1一D（铭红纳肽）0.5g/粒纳豆激酶、富铭酵母、牛初乳粉、乳清蛋白粉、海参肽、人参肽、党参、酪蛋白E（矿维益肽）0.5以粒牛初乳粉、乳清蛋白粉、海洋鱼低聚肽、大豆肽、大豆分离蛋白3.2.2样品处理取待测固体1颗进行研磨，加入1ml盐酸弧（8M）,50mMPBS,致完全溶解。经过10倍稀释后，进行脱盐处理。直至质谱分析。进样时取5UL进行分析。采用PEAKSstudio软件进行搜库。3.3仪器参数2.3.1L

4、C参数设置流动相A：去离子水，含0.1%FA流动相B：80%乙月青，含0.1%FA流速：300nL/min柱温:45°C自动进样器温度：4°C流动相梯度设置：时间(min)流速(pL/min)A相百分比B相百分比00.395520.3928420.37723500.36040520.30100600.301002.3.2MS参数设置Experiment0to120minpositive0.0eV2170,0003e650ms1350to1800m/zProfile117,500leS45ms201202.0m/z0.0m/z200to2000m/znee:28Centroid1.00e32

5、.2e4unassigned,1,7,8,>8allpreferredon30.0sdonotpickothersFULLMS/DD-MS2（TOPN）GeneralRuntimePolarityIn-sourceCIDDefaultchargestateInclusionExclusionTagsFullMSMicroscansResolutionAGCtargetMaximumITNumberofscanrangesScanrangeSpectrumdatatypedd-MS2/dd-SIMMicroscansResolutionAGCtargetMaximumITLoopcountM

6、SXcountTopNIsolationwindowIsola*ionoffsetScanrangeFixedfirstmass（N）CE/stepped（N）CESpectrumdatatypeddSettingsMinimumAGCtargetIntensitythresholdApextriggerChargeexclusionMultiplechargestatesPeptidematchExcludeisotopesDynamicexclusionIfidle4.数据结果本试验使用数据库为：uniprot-taxonomy%3A4053.fasta（人参数据库,下载链接：http

7、s://www.uniprot.org/uniprot/?query=taxonomy:4053&format=fasta&force=true&compress二yes）,uniprot-taxonomy%3A307972.fasta（海参数据库，下载链接：https://www.uniprot.org/uniprot/?query=taxonomy:307972&format=fasta&.force=true&co