大学生科技创新中期检查表4

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1、附件2：南京林业大学大学生科技创新项目中期检査报告(2012—2013年度)项口名称：四照花组培快繁体系的建立中请人：所在学院：森林资源与环境学院专业年级：水土保持与生态丄程(1001010)联系电话：指导教师：职称副教授中报日期：2011年12月7日成杲类别：*自然科学类学术论文□哲学社会科学类社会调查报告和学术论文□科技发明制作资助金额：500元共青团南京林业大学委员会填表说明•、木报告需实事求是，逐条认真填写，尚未结束研究工作的项口负责人均需填报此表；二、本报告一律要求用A4纸的打印稿件，于左侧装订成册。一式三份，由指导教师和所在学院团委审查并签署意见后报送校团委；三、如表格不够

2、，可以加附页；四、本报告需按指定时间递交，逾期不交者，按自动放弃处理，并追回全部资助经费；五、本报告考核未合格者，追回全部资助经费。一、总体目标（根据项目申请书填写）四照花集药用、观赏，绿化等多种价值于一身，是一种很有开发利用前景的树种。目前生产上四照花的繁殖以播种育苗为主，但存在萌发率低、发芽不整齐及发芽持续时间长等问题。四照花组培快繁研究方面尚未见报道。本项目通过四照花外植体消毒方案、不定芽诱导、愈伤组织诱导、增值培养和生根培养等齐阶段培养基配方的探索,形成一套完整植株再生的技术体系，以期在较短时间内提高四照花的繁殖系数，为其快速繁殖研究奠定工作基础。具体分为以下几个部分：1.外植

3、体的消毒釆用不同的消毒剂对茎段进行处理，接种30天后统计污染率、存活率，以筛选出适合的茎段消毒方案。2.不定芽诱导植物生长调节剂是促进不定芽发生的重要因素。接l.Ocm-2.Ocni的带芽嫩茎，顶芽在不定芽诱导分化培养基上，研究不同浓度的1BA,6-BA对不定芽分化的影响，确定最佳的诱导方案。初代培养所获不定芽数量有限，还不能充分发挥组织培养快速繁殖的优势，需经不断地继代增殖可获取大量的无性系材料。在初代培养的基础上，对培养基作和应的调整或重新筛选。4.愈伤组织诱导利用无菌种子苗的顶芽于腋芽进行愈伤组织诱导。以MS为培养基，加入6-BA2.Omg/L,NAAO.5mg/L和不同浓度的K

4、T。观察统计愈伤组织的数量与质量，确定最佳配方。5.生根培养选取通过壮苗培养，高3cm以上的单苗进一步进行瓶内生根诱导。影响小苗生根的因素很多，如大多数材料使用低盐浓度、低蔗糖、高生长素培养基，同时pll值、光照和温度等对材料的生根率和生根数都有影响。二、研究工作主要进展和结果，完成目标情况前期项目研究分为两个步骤：2012年3月-2012年8月通过外植体的消毒方案的筛选，获得了最优的消毒方案，建立起以四照花茎段为外植体材料的无菌体系；在此基础上将抽嫩梢的顶芽、带芽茎段等材料进行不定芽的诱导；2012年9月-2012年10月对己获得的无菌材料进行增殖培养，获得了较好的无菌材料。1・外植

5、体的消毒采取带芽的茎段，剪掉叶片及叶柄，用洗衣粉浸泡15分钟洗净表面，用口来水冲洗一个小时。在无菌条件下分别按A1-A12的处理方案消毒，用无菌水冲洗3-5遍，切取2-3cm的带芽茎段接种到培养基上，第二天开始观察记录，30天后统计并计算污染率，存活率。培养基：MS+2mg/L6-BA+0.5mg/LIBA表1外植体消毒方案75%酒精0.1%升汞10s15s20s30s4minAl10s+4minA415s+4minA720s+4minA1030s+4min5minA210s+5minA515s+5minA820s+5minAll30s+5min6minA310s+6minA615s+

6、6minA920s+6minA1230s+6min外植体消毒是植物组织培养的第一步，也是无菌快繁体系建立的重要环节。由图1可知,处理A1和A2的污染率分别为33.33%和25.00%。随着酒精和升汞吋间的延长,处理A3、A4和A5污染率有所下降，相应的存活率大大提高到100%。处理A10、All和A12污染率降到0,但存活率却降到60%,这可能是酒精消毒30s对芽的伤害较大。n污染率■存活率图1不同消毒时间对外植体消毒效杲的影响既要保证污染率又要有高的存活率，综合以上分析，以A7处理最好，即先用75%洒精处理20s后，再用0.1%升汞处理4min。2.不定芽诱导将1.0〜2.0cm的带

7、芽嫩茎和顶芽接种到添加不同浓度1BA的MS+6-BA2.Omg/L培养基上进行不定芽的诱导。40d后统计诱导率和有效芽个数。平均重复有效表2不同浓度IBA对不定芽诱导的影响丛生诱导率芽个率数冇效平均诱芽数导率/个芽数/1BAI-1973277.8%3.6I0.11-2963566.7%74.1%3.94.0I-3974077.8%4.511-1983688.9%4.0II0.5II-2973777.8%88.9%4.14.2II-3994010