GBT35331-2017番茄亚隔孢壳茎腐病菌检疫鉴定方法

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1、t■'•一…■■■IM^1:::x：：-—•■二■‘u中华人民共和国国家标准GB/T35331—2017番茄亚隔鞄壳茎腐病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofDidymellalycopersiciKlebahn2018-07-01实施2017-12-29发布期刪国銅瞒1验沁箴布中华人民共和国国家标准番茄亚隔孑包壳茎腐病菌检疫鉴定方法GB/T35331-2017*中国标准出版社出版发行北京市期阳区和平里西街甲2号(00029)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址：www・spc・org・cn

2、服务热线400-168-00102017年12月第一版*书号：155066•1-54681版权专有侵权必究本标准按照GB/Tk1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。疫局本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国中山出人境检验检O本标准主要起草人：崔铁军、罗加凤、陈定虎、刘跃庭、黄国明、杨韶勇。番茄亚隔抱壳茎腐病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了番茄亚隔抱壳茎腐病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于番茄及其他番茄亚隔鞄壳茎腐病菌寄主种子、植株、果实中番茄亚隔孑包壳茎

3、腐病菌的检疫鉴定。2番茄亚隔抱壳茎腐病菌的基本信息中文名：番茄亚隔抱壳茎腐病菌学名:Klebahn.无性世代学名Cooke.异名:Boeremialycopersici/Cooke)Aveskamp,Gruyter&Verkley.Ascochytalycopersici(Plowr.)Brunaud.Diplodina1ycopersiccHollos.英文名：ascochytablight,fruitrotoftomato,leafspotoftomato,stemcankeroftomato,stemrotoftomato分类地位:

4、番茄亚隔抱壳茎腐病菌属真菌界(Fungi).子囊菌门(Ascomycota).盘菌亚门(Pezizo.mycotina)，座囊菌纲(Dothideomycetes)‘格抱菌亚纲(Pleosporomycetidae)‘格抱菌目Pleosporales‘小双胞腔菌属(Ddjmda)。无性世代PhomaIcopeSiCooke，属腔抱纲(Coelomycetes)»球壳抱目(Sphaeropsidales)，茎点霉属(Pkoma)传播途径：病菌依靠带菌种子及病残体远距离传播。番茄亚隔抱壳茎腐病菌的其他信息参见附录A。3方法原理病原菌为害症状、

5、培养性状、形态特征、致病性测定及代谢产物Anibioic“E”的测定结果作为番茄亚隔砲壳茎腐病菌检疫鉴定的依据。4仪器用具和主要试剂4］仪器用具4］］仪器体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、生物培养箱、电子天平、高压灭菌锅、常规冰箱(一20°0。4.1.2用具培养皿(直径90mm)、白瓷盘、三角瓶、锡子、手术剪、手术刀、接种针、一次性注射器(lrnL)、棉纱、脱脂棉、酒精灯、离心管5L)。42主要试剂葡萄糖、琼脂、青霉索、链霉索、燕麦片、麦芽膏、无水乙醇、1.0%次氯酸钠(NaClO)、.％氢氧化钠(NaOH)。马铃薯匍萄糖选择性培养基P

6、DA、麦芽提取物培养基MEA、燕麦培养基0A,培养基制备方法参见附录GB/T35331—20175病菌的鉴定5.1疑似材料挑选5.1.1种子中疑似材料挑选将待检样品倒人洁净□瓷盘内，挑选干瘪、弱小、畸形的可疑病种子和植株残体作为实验材料，植株残体包括枝、叶、叶柄等。5.1.2植株疑似材料挑选取待检植株，仔细观察植株枝、叶、果实上病菌为害症状（参见A.4、图A.1）,枝条基部是否有黑褐色病斑，枝条上部是否有溃疡病斑，叶片上是否有同心轮纹状病斑，果实是否有腐烂，枝、叶、果实上是否有病菌的子实体（分生抱子器）发现病菌子实体的，直接用灭菌的挑针或

7、牙签挑取，制片镜检，显微镜下观察分生抱子器、分生抱子的形态特征。可疑的枝、叶、果实材料立即进行病菌分离培养。52分离培养5.2.1实验材料前处理疑似材料为植株的枝、叶，用自来水充分冲洗，取病健交界组织，剪成约0.4cmX0.4cm小块，用05%的次氯酸钠溶液消喙5min,无菌水冲洗3次，灭菌滤纸吸干水分后培养：疑似材料为果实，果实病健交界处组织用75%乙醇擦拭表面消毒，再用灭菌针挑取小块组织进行培养。种子中挑选出的植株残体和可疑种子分别用纱布包好，放人05%的次氯酸钠溶液中，消毒5min，灭菌水冲洗3次，种子于无菌条件下22°C保湿24h

8、,再置于一20°C下冰冻24h后培养，经表面消毒后的植株残体，用灭菌滤纸吸干水分后直接培养。5.2.2病菌分离培养前处理后的实验材料置马铃薯葡萄糖选择性培养基PDA平板上，每皿放置4粒〜5粒或