2019-2020年高中生物 专题5 课题1 DNA的粗提取与鉴定导学案新人教版选修1 (I)

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1、2019-2020年高中生物专题5课题1DNA的粗提取与鉴定导学案新人教版选修1(I)【自主学习】一、提取DNA的方法思考1：DNA存在于细胞的哪些部位？思考2：提取生物大分子的一般思路是什么？对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与、和等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。1、DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。课本图5—1是DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线，请根据曲线图，0.14mol/LNaCl浓度

2、

3、溶解度思考1：在什么浓度下，DNA的溶解度最小？思考2：DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？思考3：如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？此外，DNA不溶于溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。2、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解，但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80度的高温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对DNA没有影响。3、DNA的鉴定原理在条件下，DNA遇会被染成色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。二、实验设计阅读教材

4、P55“实验设计”，讨论并回答下列问题：1、实验材料的选取选取材料时应本着、、的原则。思考1：你认为教材提供的材料中哺乳动物的血液适合提取DNA吗？思考2：哺乳动物成熟的红细胞有什么特点？2、破碎细胞，获取含DNA的滤液若用动物肝脏等组织为材料，则需要研磨、匀浆和离心或过滤，对设备要求较高，操作烦琐；若以植物组织（如菜花，又称花椰菜）为材料，则需要研磨并加入、离心或过滤，以破坏。思考1：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？鸡血细胞液的提取：向新鲜鸡血液中加入抗凝固剂——，并搅匀，置于低温下静置1d或离心；结果：血液分层：上层为淡黄色液体，是，

5、下层为红色沉淀物，是（主要是红细胞）。向鸡血细胞液中加入一定量并玻棒搅拌，用过滤后，收集滤液。即可获得含有DNA的滤液。思考2：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？思考3：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响?思考4：此步骤获得的滤液中是否是纯净的DNA？如果不是，可能含有哪些细胞成分？3、去除滤液中的杂质（阅读课本的三个方案）方案一：30mL滤液→加NaCl使DNA溶解→过滤得滤液→加蒸馏水使DNA析出→过滤得过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA－NaCl溶解液方案二：30mL滤液→加嫩肉粉（木瓜蛋白酶）→静置10分钟→

6、得DNA滤液方案三：30mL滤液→60～67℃处理→过滤得DNA滤液思考1：这三个方案的原理分别是什么？方案一：方案二：方案三：思考2：在方案一种，“加NaCl使DNA溶解→过滤得滤液”的目的是除去（可溶、不溶）于NaCl溶液中的细胞杂质；“加蒸馏水使DNA析出→过滤得过滤物”的目的是除去（可溶、不溶）于NaCl溶液中的细胞杂质。4、DNA的析出将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、冷却的，静置，溶液中会出现，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。思考1：为什么加入的酒精需要冷却的？5、DNA的鉴定取两支20

7、ml的试管，各加入物质的量浓度为的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的。混合均匀后，将试管置于中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变。注意点：实验中需要对照，目的：证明。三、（以鸡血红细胞为例）主要实验步骤：①破碎细胞，释放DNA（核物质）方法：将5～10mL鸡血细胞液加入20mL蒸馏水中；用玻棒同方向搅拌5min；用3～4纱布过滤，以除去颗粒较大的杂质过滤；收集滤液目的：破坏细胞，释放核物质注意：搅拌不能用力过大，以防止

8、打碎DNA分子；DNA存在：多数与蛋白质结合，存在于滤液中②溶解细胞核内DNA方法：向滤液中加入2倍体积的2mol/LNaCl溶液，搅拌1min；过滤获取滤液目的：使与DNA结合的核蛋白解聚，释放出DNA；DNA溶解于高溶液NaCl溶液中注意：按同一方向搅拌③DNA析出方法：沿烧杯壁向滤液中缓慢加入蒸馏水，并轻轻按同一方向搅拌，使DNA析出，直到丝状物不再增加；可以在玻棒上收集到黏稠物（或过滤或离心收集黏稠物）目的：降低NaCl溶液浓度达到0.14mol/L左右，使DNA析出注意：加入的蒸馏水不能过多，使NaCl溶液浓度过低，DNA又会重新

9、溶解黏稠物：丝状、略带黄色（DNA分子上附着有少量蛋白质）④DNA的初步纯化方法：向20mL2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向搅拌3min，使DNA充分溶解；过滤