2[1].2.2《动物细胞融合与单克隆抗体》

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1、生物选修3现代生物科技专题专题2细胞工程2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体·一、动物细胞融合：2、原理：膜具有一定的流动性1、概念：《选修3》P.52动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。诱导方式物理法化学法生物法：灭活的病毒仙台病毒紫外线丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）3、过程：（与植物细胞融合的基本原理相同）细胞完成融合的标志：细胞核融合为一个核4、动物细胞融合与植物细胞杂交的主要区别：⑴促融剂不同：植物：主要是聚乙二醇（PEG）动物：除PEG外，还有灭活的病毒⑵植物细胞融合过程中，首先要除去细胞壁，制备原生质体；而动物细胞无细胞壁

2、，可直接诱导融合见《步步高》P.216——表5、动物细胞融合的应用：制备单克隆抗体主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较二、单克隆抗体：⑴其由何种细胞产生？⑵主要分布在哪里？⑶如何得到抗体？提问？抗原动物体内抗体刺激效应B细胞不仅产量低、纯度低而且制备的抗体特异性差，灵敏度低抗原不纯抗体不纯筛选单一的效应B细胞（但不能在体外大量增殖产生大量

3、的抗体）抗原动物体内抗体刺激效应B细胞1、单克隆抗体的制备：获得杂交瘤细胞动物细胞培养提取单克隆抗体①将抗原注入小鼠体内获得效应B淋巴细胞②效应B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合③用特定培养基筛选出杂交瘤细胞①筛选能够产生所需抗体的细胞群②再在培养液或小鼠腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取BBBB瘤瘤瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞筛选杂种细胞已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。在整个制备的过程中要经过几次筛选？

4、Ⅰ筛选得到杂交瘤细胞，Ⅱ筛选先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞下培养筛选出特异抗体的细胞群2、单克隆抗体的应用:应用:疾病的诊断、治疗和预防。优点:特异性强、灵敏度高。实例:①各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌及血吸虫等数百种疾病的诊断；②在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士,能识别“自己”与“异己”，一旦发现致病因素便与之结合将其杀死。③若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。